【摘 要】
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目的建立以单抗为基础的醋酸甲羟孕酮间接竞争ELISA检测方法。方法将羧甲基羟胺盐酸盐和醋酸甲羟孕酮(MPA)反应生成MPA-3-(O-羧甲基)肟(MPS),MPS与牛血清白蛋白(BSA)偶联生成
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生实验室; 上海出入境检验检疫局;
【基金项目】
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上海科技兴农重点攻关项目[沪农科攻字(2006)第6-5-1号]
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目的建立以单抗为基础的醋酸甲羟孕酮间接竞争ELISA检测方法。方法将羧甲基羟胺盐酸盐和醋酸甲羟孕酮(MPA)反应生成MPA-3-(O-羧甲基)肟(MPS),MPS与牛血清白蛋白(BSA)偶联生成免疫原,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备MPA单克隆抗体(MPA-McAb),建立水产品中MPA残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果经飞行质谱法测得MPS-BSA分子量为76 045.656 3,MPS与BSA偶联比为25.17;MPA-McAb最佳稀释倍数为1∶400 00;包被抗原最佳质量浓度为1μg/mL;标准曲线呈线性,相关系数R2=0.983 7,IC50=3.630 ng/mL;最低检测限为0.133 ng/mL;批内和批间变异系数分别为3.125%和3.557%;黄鳝鱼肉样的平均添加回收率为80.46%~101.00%;检测方法与甲羟孕酮、甲地孕酮的交叉反应(CR%)分别为0.26%,10.67%,与其他抗生素药物无交叉反应。结论醋酸甲羟孕酮间接竞争ELISA检测方法可用于水产品中醋酸甲羟孕酮残留量检测。
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