背景:瓣膜间质细胞是心脏瓣膜中的主要细胞成分,成肌纤维细胞是一种能够表达平滑肌α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原纤维,并具有一定分化潜能的重要的瓣膜间质细胞,不仅在瓣膜的结构中起着支架作用,尤其在瓣膜的正常生理以及病理应答过程中发挥着重要的调控作用。目的:建立一套可靠的心脏瓣膜成肌纤维细胞分离、原代培养与鉴定的方法,为心瓣膜钙化等疾病的进一步研究奠定基础。方法:1从猪心中获取主动脉辨,分别用酶联和消化法、普通酶消化法以及组织块种植法提取猪主动脉瓣瓣膜成肌纤维细胞,进行原代培养;2显微镜观察3种方法培养出的成肌纤维细胞的活性和形态;3用光学显微镜和免疫细胞化学方法鉴定细胞。结果与结论:13种方法中,利用胰酶和胶原酶Ⅱ联合消化,然后迅速终止消化的方法获得成肌纤维细胞的活性更高,状态更好,纯度更高;2在荧光显微镜下,观察到获得的主动脉瓣成肌纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白染色阳性,抗血管性血友病因子染色阴性,提示培养的细胞为成肌纤维细胞。