【摘 要】
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目的 制备细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)重组蛋白兔血清抗体并鉴定其特性.方法 将设计合成的CDK4基因克隆至载体pET21a(+)中,构建重组质粒pET21a
【机 构】
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温州医科大学分子病毒与免疫学研究所,浙江温州325035
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目的 制备细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)重组蛋白兔血清抗体并鉴定其特性.方法 将设计合成的CDK4基因克隆至载体pET21a(+)中,构建重组质粒pET21a(+)/CDK4,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经镍螯合亲和层析纯化,将纯化的重组蛋白CDK4与等量弗式佐剂混合,经背部皮下多点免疫日本大耳白兔,隔周1次,共免疫3次.于末次免疫后0(当天)、2、4、6、8周采血,分离血清.间接ELISA法检测效价,免疫荧光及免疫组化法检测特异性.结果 经酶切及测序鉴定,重组质粒pET21 a(+)/CDK4构建正确.重组蛋白CDK4相对分子质量约为19 100.第8周CDK4兔血清抗体效价达1∶163 840,能特异性识别宫颈癌Siha细胞及宫颈癌组织中表达的CDK4蛋白.结论 成功制备了高效价、特异性强的CDK4兔血清抗体,为进一步研究CDK4生物学特性奠定了基础.
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