【摘 要】
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目的 利用pET-28a蛋白表达载体,在大肠埃希菌BL21 (DE3) pLysS中重组表达鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa). 方法 PCR扩增获得鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(
【机 构】
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江苏大学检验医学研究所免疫研究室,江苏镇江212013
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目的 利用pET-28a蛋白表达载体,在大肠埃希菌BL21 (DE3) pLysS中重组表达鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa). 方法 PCR扩增获得鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)基因,克隆入pET 28a表达载体,构建重组表达质粒pET28a/Omp33-36aa20-299,转化入大肠埃希菌BL21 (DE3) pLysS中,经IPTG诱导蛋白表达,对包涵体表达的蛋白进行变性复性处理,用镍柱亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析. 结果 PCR扩增获得大小约862 bp的目的片段,构建的重组表达质粒pET28a/Omp33-36aa20-299,经双酶切鉴定成功插入目的基因片段,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导成功表达Omp33-36aa20-299 6 His重组蛋白,SDS PAGE电泳显示重组蛋白分子质量单位约为31.5 ku,经镍亲和纯化得到高纯度的重组Omp33-36. 结论 成功重组表达鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa),为进一步研究其对免疫系统的影响奠定了实验基础.
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