目的 构建带有U6启动子的人端粒酶催化亚单位锤头状核酶真核表达质粒及其突变体,转染人肝癌细胞株SMMC7721,观察端粒酶活性、细胞增殖和凋亡的情况.方法用分子克隆技术构建由U6作为启动子、绿色荧光蛋白基因作为报告基因的核酶真核表达质粒pGTRz-U6及其突变体pGTmRz-U6,并以空质粒pEGFP-C1作为对照.Lipofectamine2000转染人肝癌细胞株SMMC7721,G418筛选阳性克隆.RT-PCR检测核酶及hTERT基因的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)作细胞生长曲线观察其生长情况,TRAP-银染法检测端粒酶活性变化,流式细胞计数(FCM)法检测细胞的凋亡水平. 结果核酶、突变核酶在SMMC7721中持续表达;凝胶成像系统分析SMMC7721-pEGFP-C1、SMMC7721-mRz、SMMC7721-Rz hTERT基因表达,用SPSS10.0软件对3种细胞进行分析,发现三者hTERT基因表达水平不同(F=47.987,P＜0.01);t检验分析得出SMMC7721-Rz hTERT基因表达明显低于SMMC7721 mRz和SMMC7721-pEGFP-C1(t值分别为-7.640和-11.602,P值均＜0.01).SMMC7721-pEGFP-C1和SMMC7721-mRz hTERT表达没有区别(t=0.178,P＞0.05).TRAP-银染及FCM结果分别显示,随着细胞的分裂,SMMC7721-Rz和SMMC7721-mRz细胞端粒酶活性逐渐降低,凋亡水平逐渐增加,7PDS细胞凋亡率分别是29.86%和9.87%,而对照组SMMC7721-pEGFP-C1凋亡率为3.36%.结论与突变核酶及空质粒相比,带有U6启动子的人端粒酶hTERT锤头状核酶具有明显降低hTERT表达和端粒酶活性,诱导细胞凋亡的作用,并且此作用随着细胞的分裂而逐渐增强,因此有望成为肝癌基因治疗的有效手段。