研究肝再生增强因子(ALR)保护急性肝损伤的作用及其机制。
方法HL-7702细胞分为正常对照组、CCl4急性肝损伤组、ALR+CCl4干预组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+CCl4干预组以及ALR+3-MA+CCl4干预组,CCl4处理前8 h对ALR+CCl4和ALR+3-MA+CCl4干预组转染ALR质粒,对除正常对照组外其余四组给予CCl4处理,30 min后对3-MA+CCl4和ALR+3-MA+CCl4干预组给予3-MA处理,CCl4处理24 h后收集细胞。收集HL-7702细胞和培养上清液,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;Western blot检测细胞中ALR、细胞周期蛋白D、细胞周期蛋白E、增殖细胞核抗原(PCNA)、 自噬相关基因7(Atg7)和自噬基因LC3、p62、Beclin-1水平;实时定量PCR检测ALR mRNA水平。多组样本均数的两两比较采用One-way ANOVA分析。
结果ALR+CCl4干预组与急性肝损伤组相比,ALR蛋白以及mRNA表达水平显著升高(P值均< 0.05 );CCl4急性肝损伤组与正常对照组相比,ALR蛋白以及mRNA表达水平同样显著升高(P值均< 0.05)。ALR+CCl4干预组与CCl4急性肝损伤组相比,细胞上清液中ALT(0.73±0.17与1.43±0.38,P值均< 0.05)、AST(19.85±1.83与56.73±6.25,P值均< 0.05)水平显著降低(单位均为IU/L);肝细胞中再生相关细胞周期蛋白D、细胞周期蛋白E、PCNA表达水平以及自噬相关LC3、Atg7、Beclin-1表达水平显著增高,P62表达水平显著降低,提示ALR可以保护急性肝损伤,促进肝细胞的再生,增强肝细胞的自噬水平。ALR+3-MA+CCl4干预组再生相关蛋白的表达水平相较于ALR+CCl4干预组明显降低,与3-MA+CCl4干预组相比无明显差异,提示抑制自噬后,肝细胞再生水平明显下降,ALR促进肝再生的作用也明显减弱。
结论ALR可以促进肝脏实质细胞再生,这种再生是通过调节自噬完成的。