【摘 要】
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目的 观察体外RNA干扰(RNAi)抑制骨桥蛋白(OPN)表达对人肾癌细胞生长和侵袭能力的影响,并探讨其机制.方法 构建短发夹RNA(shRNA)重组质粒,转染肾癌ACHN细胞株,筛选获得稳定转
【机 构】
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武汉市中心医院骨科,华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科
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目的 观察体外RNA干扰(RNAi)抑制骨桥蛋白(OPN)表达对人肾癌细胞生长和侵袭能力的影响,并探讨其机制.方法 构建短发夹RNA(shRNA)重组质粒,转染肾癌ACHN细胞株,筛选获得稳定转染的细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测OPN mRNA表达水平;Western blot检测OPN、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的表达;流式细胞术、噻唑蓝(MTT)比色法和Transwell实验分别检测细胞周期变化、细胞生长和和侵袭能力.结果 与未转染的ACHN细胞(4.16±0.12)比较,转染重组质粒后的细胞(ACHN/OPN)中OPN mRNA的表达量(1.68±0.15)下降了59.6%(P<0.05),而OPN、MMP-2和MMP-9蛋白的表达量(51.15±6.03、89.26±5.15、167.85±13.42)较转染前(214.01±12.08、187.53±9.56、233.12±15.78)分别下降了76.1%、52.4%和28.0%(P<0.05),细胞分裂出现S期停滞,凋亡二倍体数量增加,细胞的生长、迁移和侵袭能力受到明显抑制.结论 OPN在人肾癌细胞的生长和侵袭过程中发挥重要作用,这些过程与MMP-2和MMP-9的表达密切相关.
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