【摘 要】
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目的建立改良分子信标-实时PCR检测霍乱弧菌的快速方法,应用于霍乱监测.方法根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位(ctxA)的保守序列,设计一对引物和改良分子信标探针,
【机 构】
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深圳市疾病预测控制中心,广东,深圳,518020;厦门大学生命科学学院,福建,厦门,361005
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目的建立改良分子信标-实时PCR检测霍乱弧菌的快速方法,应用于霍乱监测.方法根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位(ctxA)的保守序列,设计一对引物和改良分子信标探针,并进行特异性和灵敏度分析;同时以11种细菌作对照,建立改良分子信标检测霍乱孤菌的实时PCR反应体系,应用于霍乱监测.结果霍乱弧菌改良分子信标检测体系检测12种细菌,只有霍乱弧菌有荧光信号,与其他细菌无交叉反应,DNA灵敏度为102.4fg/ul,菌液灵敏度为32cfu/ml或3 cfu/PCR反应体系.对100份海产品和30份腹泻病人大便标本进行检测,结果都为阴性.检测时间仅需2h.结论改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于霍乱的快速诊断,为霍乱的分子流行病学调查提供新的检测手段.
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