【摘 要】
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目的 分析转HBsAg基因小鼠与正常小鼠肝细咆质膜的差异蛋白质组,为了解乙型肝炎发病机制,寻找药物作用靶标提供指导.方法 构建6月龄转HBsAg基因C57小鼠模型,检测转基因组小鼠
【机 构】
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上海市公共卫生临床中心科学研究部,上海市公共卫生临床中心病理科
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目的 分析转HBsAg基因小鼠与正常小鼠肝细咆质膜的差异蛋白质组,为了解乙型肝炎发病机制,寻找药物作用靶标提供指导.方法 构建6月龄转HBsAg基因C57小鼠模型,检测转基因组小鼠和正常对照C57小鼠肝脏病理变化.以转基因组和正常对照C57小鼠肝脏为材料,蔗糖密度梯度离心结合磁珠纯化法纯化肝细胞质膜,Western印迹验证纯化的质膜组分纯度,二维凝胶电泳结合ImageMaster软件图像分析质膜蛋白质,获得的差异蛋白质点经胰酶酶切后,进行差异蛋白质的液相色谱串联质谱分析鉴定.结果 转HBsAg基因小鼠肝脏呈现肝炎表现,而正常对照C57小鼠肝脏未见异常.蔗糖密度梯度离心结合磁珠纯化法可以有效富集小鼠肝质膜组分,并减少线粒体的污染.小鼠肝脏质膜组分中,共获得30个≥2倍的差异蛋白质点,成功鉴定到11个可能与HBV感染相关的差异蛋白质,其中9个蛋白质在转基因鼠肝质膜中表达上调,2个蛋白质表达下调.这些差异蛋白质包括细胞支架蛋白、心脏钙离子释放通道蛋白、细胞色素B5和ATP合成酶α亚基等.结论 本研究鉴定了一批与HBsAg基因表达相关的小鼠肝脏质膜蛋白质,它们可能是乙型肝炎的药物作用靶标,本研究将为进一步探讨HBV感染的机制提供指导.
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