One-step RT-PCR-RFLP方法筛查新型甲型H1N1流感病毒Oseltamivir耐药株

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目的分析2013年江西省甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因第275位氨基酸变异情况,掌握甲型H1N1流感病毒耐药特性,为甲型H1N1流感临床治疗和疾病控制提供参考。方法收集江西省流感监测哨点医院采集的流感样病例的鼻咽拭子标本,采用狗肾传代细胞(MDCK)对标本进行病毒分离,对分离的31株新型甲型H1N1流感病毒进行核酸提取,采用一步法逆转录-聚合酶链反应(One-step RT-PCR)扩增病毒NA基因部分片段,采用限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)方法,分析扩增的部分NA基因第275位是否发生组氨酸(H)到酪氨酸(Y)的突变。结果2013年江西省31株甲型H1N1流感病毒NA基因第275位氨基酸均为组氨酸,未发生变异。结论 2013年31株毒株均对Oseltamivir敏感,One-step RT-PCR-RFLP方法筛查新型甲型H1N1流感病毒Oseltamivir耐药株简便可行。 Objective To analyze the amino acid variation of the 275th amino acid sequence of neuraminidase (NA) gene of the type A H1N1 influenza virus in Jiangxi province in 2013 and to master the drug resistance of the type A H1N1 influenza virus and to provide reference for the clinical treatment and disease control of the type A H1N1 influenza. Methods Nasopharyngeal swab specimens were collected from influenza-like sentinel hospitals in Jiangxi Province. The samples were isolated from the virus by using MDCK. The nucleic acids were isolated from 31 newly isolated influenza A (H1N1) One-step reverse transcription-polymerase chain reaction (One-step RT-PCR) was used to amplify a portion of the NA gene of the virus and the amplified partial NA gene was analyzed by restriction fragment length polymorphism (RFLP) At position 275, a mutation of histidine (H) to tyrosine (Y) occurs. Results The amino acid at position 275 of NA gene of 31 strains of influenza A (H1N1) in Jiangxi province in 2013 was histidine, which showed no variation. Conclusion The 31 isolates were all susceptible to Oseltamivir in 2013. One-step RT-PCR-RFLP screening of Oseltamivir resistant strains of new type A H1N1 influenza virus was simple and feasible.
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