建立了一种能同时测定人血清中伏立康唑（VRC）及伏立康唑氮氧化物（VNO）、泊沙康唑（PCZ）、伊曲康唑（ICZ）及羟基伊曲康唑（HICZ）、氟康唑（FCZ）、卡泊芬净（CPF）5种抗真菌药物及相关代谢产物的测量方法，并对基质匹配标准品和质控物的稳定性进行研究并优化，可应用于临床进行患者血清药物浓度检测。血清样本加入含同位素内标的萃取液进行蛋白沉淀处理后，稀释上清液并进样检测。采用甲酸-乙腈和甲酸-乙酸铵-水为流动相进行梯度洗脱，CNW Shell C18（2.1 mm ×100 mm，2.6 μm）色谱柱进行分离。采用高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS），电喷雾电离源正离子(ESI+)，多反应监测扫描模式（MRM），基质匹配标准品、内标法定量。结果表明：伏立康唑、伏立康唑氮氧化物、伊曲康唑、羟基伊曲康唑线性范围为0.1 ～ 10 μg/mL，泊沙康唑线性范围为0.05 ～ 5 μg/mL，氟康唑线性范围为0.5 ～ 50 μg/mL，卡泊芬净线性范围为0.2～20 μg/mL，各化合物线性相关系数大于0.995，准确度为91% ～ 115%，批内和批间精密度变异系数（CV）均＜15%，混合基质效应偏差为-1.15% ～ 2.23%。方法操作简便，准确度高，稳定性好，可适用于临床对血清中上述抗真菌药物的血药浓度监测。