【摘 要】
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目的:建立防污染PCR-微孔板杂交-EIA检测技术,并用于炭疽芽孢杆菌芽孢的检测.方法:根据炭疽芽孢杆菌毒力相关基因设计引物,筛选合适引物,建立用UDG酶防污染的PCR扩增-微孔板
【机 构】
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军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071
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目的:建立防污染PCR-微孔板杂交-EIA检测技术,并用于炭疽芽孢杆菌芽孢的检测.方法:根据炭疽芽孢杆菌毒力相关基因设计引物,筛选合适引物,建立用UDG酶防污染的PCR扩增-微孔板杂交与酶联显色检测炭疽芽孢杆菌的方法,并探讨试剂的室温稳定系统,将建立的方法用于模拟污染炭疽芽孢土壤样品的检测.结果:根据炭疽芽孢杆菌荚膜和水肿因子基因设计的引物,可以同时检测两个毒力相关质粒的存在,用0.1?U的UDG可以防止1010产物的污染,微孔板杂交-酶联显色检测比单纯PCR-电泳敏感10倍.加入稳定剂的PCR-微孔板杂交-EIA体系可以耐受7?d的37℃破坏试验.将该体系用于污染土壤的检测,可以检测出0.25?g土壤中103个炭疽芽孢的存在.结论:所研制的防污染PCR-微孔板杂交-EIA试剂克服了目前PCR试剂运输不便,产物污染所致假阳性和判定结果欠客观的缺点,为炭疽芽孢的快速检测提供了有力手段.
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