【摘 要】
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目的 建立体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cells,MSCs)的方法 ,探讨其表型和功能特点。方法 用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨
【机 构】
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大理医学院,四川大学华西基础医学与法医学院,四川大学药学院
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目的 建立体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cells,MSCs)的方法 ,探讨其表型和功能特点。方法 用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓 MSCs,传代扩增 ,测定生长曲线 ,通过形态学观察 ,细胞化学及免疫细胞化学法分析大鼠骨髓 MSCs的表型和功能特点。结果 MSCs属骨髓中单个核细胞 ,密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓 MSCs,在含 10 %小牛血清的 L - DMEM中 ,1、3、5代细胞生长曲线基本相同 ,增殖快 ,每传代一次细胞约增加 2 .2倍。细胞呈均一的成纤维细胞样 ,表达CD4 4、CD54、纤维粘连蛋白 (fibronectin,FN )、 型胶原 (collagen I)。加入地塞米松 (Dex 10 - 8m ol/ L )、β-甘油磷酸钠(β- GP10 mm ol/ L)、抗坏血酸 (AA5 0 μg/ ml)可诱导 MSCs分化为成骨细胞 ,碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,AL P)活性增高 ,形成矿化结节。结论 所分离、培养的细胞具有间充质干细胞的表型和功能特点 ,建立了体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓 MSCs的方法
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