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目的分离鉴定链霉菌I06A-03304发酵液中具血管内皮细胞生长因子受体-2胞内酪氨酸激酶(VEGFR2-CD)抑制活性的次生代谢产物。方法采用大孔吸附树脂、羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)、C-18反相色谱(ODS)、高压液相色谱(HPLC)等分离手段对次生代谢产物进行分离纯化;通过二级质谱(ESI+-MS2)、紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)、核磁共振波谱(NMR)对其结构进行鉴定,以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其次生代谢产物对VEGFR2-CD的抑制活性。结果分离得到两个二酮哌嗪类化合物:3304A和3304C;化合物3304A的化学结构与环(脯氨酸-亮氨酸)一致,化合物3304C的化学结构与环(脯氨酸-苯丙氨酸)一致,均对VEGFR2-CD表现出一定的抑制活性。结论化合物3304A和3304C是具有VEGFR2-CD抑制活性的二酮哌嗪类次生代谢产物,并为本研究首次报道。