热损伤对肝细胞肝癌细胞增殖及侵袭转移特性影响的实验研究

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目的体外实验评价热损伤对肝细胞肝癌(HCC)细胞增殖、侵袭转移能力及上皮-间质细胞转化(EMT)等特性的影响,探索热消融与HCC复发转移之间的关系。方法通过体外加热构建Mc ARH7777 HCC细胞热损伤模型。CCK-8法检测热损伤对HCC细胞增殖能力的影响,流式细胞技术检测细胞周期情况。Transwell实验研究热损伤对HCC细胞侵袭能力的影响。荧光定量-聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白印迹(Western blot)分析热损伤对HCC细胞侵袭及EMT相关分子标志物VEGF、MMP-9、Nm23、E-cadherin、vimentin的m RNA和蛋白表达的影响。结果 Mc A-RH7777 HCC细胞热处理条件为43.5℃水浴30 min。热处理后2~5 d细胞增殖能力显著高于对照组(P<0.05)。热处理48 h及72 h后处于G1期细胞比例降低,S+G2期细胞比例增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,热处理后24 h后HCC细胞侵袭能力差异不明显,而热处理72 h后细胞侵袭能力显著增加(22.3±2.46对14.2±1.82,P<0.001)。RT-PCR和蛋白印迹分析结果显示,热处理72 h后HCC细胞VEGF、MMP-9和vimentin表达水平显著增加,E-cadherin表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论亚致死量热损伤诱导Mc ARH7777 HCC细胞发生EMT并增加其增殖和侵袭转移能力,表现出更高的恶性潜能。
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