长非编码RNA AFAP1-AS1对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制

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目的:研究长非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常甲状腺和甲状腺癌细胞株中AFAP1-AS1的表达。将甲状腺癌细胞株WRO分成3组,AFAP1-AS1沉默表达组(AFAP1-AS1-siRNA组)、阴性对照组(NT-siRNA组)及空白对照组(Blank组),AFAP1-AS1-siRNA组和NT-siRNA组采用Lipofectamine? 3000分别转染AFAP1-AS1-siRNA、NT-siRNA,Blank组加入PBST对照。CCK-8检测3组细胞增殖能力,Transwell实验检测侵袭能力,Western blotting检测Rho A、Cyclin D1和MMP-9蛋白的表达情况。结果:正常甲状腺细胞株FRTL-5、甲状腺癌细胞株SW579、CAL-62、FRO、WRO的AFAP1-AS1相对表达量分别为1.03±0.04、2.95±0.17、5.31±0.35、7.26±0.49、9.67±0.53,5组间比较差异具有统计学意义(n F=16.932,n P=0.027);AFAP1-AS1在WRO细胞中表达量最高,因此,选择WRO细胞进行后续实验。AFAP1-AS1-siRNA组、NT-siRNA组、Blank组3组细胞AFAP1-AS1的相对表达量分别为0.23±0.02、1.02±0.04、1.03±0.05,差异具有统计学意义(n F=13.590,n P=0.006),与NT-siRNA组相比,AFAP1-AS1-siRNA组AFAP1-AS1表达量显著降低(n P<0.001)。3组细胞转染后3、4 d的n A450值分别为0.68±0.06、1.17±0.09、1.22±0.09,0.96±0.08、1.69±0.11、1.72±0.12,差异均具有统计学意义(n F=7.318,n P=0.016;n F=10.351,n P=0.004),第3、4 d AFAP1-AS1-siRNA组、NT-siRNA组两组比较,差异均有统计学意义(n P=0.043;n P=0.013)。3组侵袭细胞数分别为(72.8±5.7)个、(145.6±8.9)个、(148.4±7.3)个,差异具有统计学意义(n F=37.273,n P=0.034),AFAP1-AS1-siRNA组侵袭细胞数少于NT-siRNA组(n P=0.021)。3组细胞Rho A蛋白表达量分别为0.34±0.03、1.02±0.04、1.04±0.03,差异具有统计学意义(n F=9.667,n P=0.013),AFAP1-AS1-siRNA组Rho A蛋白表达量显著低于NT-siRNA组(n P=0.018);3组Cyclin D1蛋白表达量分别为0.52±0.04、1.03±0.02、1.05±0.04,差异具有统计学意义(n F=15.464,n P=0.010),AFAP1-AS1-siRNA组Cyclin D1蛋白表达量显著低于NT-siRNA组(n P=0.023);3组MMP-9蛋白表达量分别为0.42±0.04、1.05±0.03、1.02±0.04,差异有统计学意义(n F=10.328,n P=0.032),AFAP1-AS1-siRNA组MMP-9蛋白表达量显著低于NT-siRNA组(n P=0.035)。n 结论:AFAP1-AS1沉默可抑制甲状腺癌细胞增殖、侵袭,其机制可能与下调Rho A、Cyclin D1、MMP-9蛋白表达相关。
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