【摘 要】
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目的 构建人的生物钟基因Period2 (hPer2)真核表达载体pEGFP-N1-hPer2,观察其在骨肉瘤细胞MG63中的表达.方法 应用实时定量荧光反转录聚合酶链反应(FQ-PCR)技术从MG63细胞中
【机 构】
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430060,武汉大学人民医院骨一科
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目的 构建人的生物钟基因Period2 (hPer2)真核表达载体pEGFP-N1-hPer2,观察其在骨肉瘤细胞MG63中的表达.方法 应用实时定量荧光反转录聚合酶链反应(FQ-PCR)技术从MG63细胞中扩增hPer2,并将PCR产物经双酶切后定向克隆入pEGFP-N1的多克隆位点,采用脂质体介导转染骨肉瘤细胞MG63,采用FQ-PCR和Western blot分别检测hPer2的表达.结果 重组质粒经Pst Ⅰ、Kpn Ⅰ双酶切和测序与hPer2基因序列一致,利用脂质体介导将pEGFP-N1-hPer2重组质粒成功转染到骨肉瘤细胞MG63中并获得了hPer2基因的过表达.FQ-PCR显示实验组(pEGFP-N1-hPer2组)的mRNA水平(7.84±1.17)明显高于空载体组(pEGFP-N1组,1.42±2.11)和空白对照组(1.21±1.61);Western blot显示实验组hPer2蛋白(0.382±1.131)的表达明显高于空载体组(0.178 ±2.110)和空白对照组(0.166±1.951),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建pEGFP-N1-hPer2真核表达载体,并能够在骨肉瘤细胞MG63中过表达.
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