【摘 要】
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为制备抗人肝脏DnaJ-like蛋白(Human liver DnaJ-like protein,HLJ1)的单克隆抗体,并建立免疲组化和双抗体夹心ELISA检测HLJ1的方法,采用淋巴细胞杂交瘤技术,获得两株能稳定
【机 构】
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华南理工大学生物科学与工程学院,广州番禺大学城,510006南方医科大学生物技术学院分子免疫学研究所,广州,510515;
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为制备抗人肝脏DnaJ-like蛋白(Human liver DnaJ-like protein,HLJ1)的单克隆抗体,并建立免疲组化和双抗体夹心ELISA检测HLJ1的方法,采用淋巴细胞杂交瘤技术,获得两株能稳定分泌抗HLJ1单克隆抗体的杂交瘤细胞株A4C7和C4C8.经鉴定,两株单抗的亚类均为IgGl,并且效价高、特异性好.以单抗A4C7和C4C8作为一抗,对人胎肝组织石蜡切片进行免疫组化染色.结果表明.两株单抗均为阳性染色,且HLJ1主要定位于胎肝细胞的胞浆.选取A4C7进行HRP酶标记.并以HRP-A4C7作为酶标抗体,以C4C8作为包被抗体,建立双抗体夹心ELISA方法,并进行棋盘滴定确定抗体的最佳工作浓度.该检测方法的线性范围是15-750 ng/mL,灵敏度下限达15 ng/mL,特异性良好.所建立的免疫组化和双抗体夹心ELISA法可用于快速,灵敏地检测组织及血清中的HLJ1蛋白.为HLJ1的肿瘤相关性研究提供了有力的工具.
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