13C6-酪氨酸标记的蛋清溶菌酶的表达及NMR测定

来源 :烟台大学学报:自然科学与工程版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：leezuo

【摘要】

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针对蛋白质核磁共振(NMR)信号复杂难以解析的问题,选用选择性标记方法可简化蛋白质NMR谱图。本实验以蛋清溶菌酶(HEL)为目标蛋白,构建了pET-HEL蛋白表达载体,转入到大肠杆菌

【作者】

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王瑞英余飞刘万卉

【机构】

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烟台大学新型制剂与生物技术药物研究山东省高校协同创新中心、分子药理和药物评价教育部重点实验室（烟台大学）,绿叶制药集团有限公司

【出处】

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烟台大学学报:自然科学与工程版

【发表日期】

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2019年3期

【关键词】

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选择性标记 NMR 蛋清溶菌酶酪氨酸蛋白质的表达纯化包涵体 selective labeling naclear magnetic resonance(N

【基金项目】

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国家自然科学基金资助项目(81773679)

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针对蛋白质核磁共振(NMR)信号复杂难以解析的问题,选用选择性标记方法可简化蛋白质NMR谱图。本实验以蛋清溶菌酶(HEL)为目标蛋白,构建了pET-HEL蛋白表达载体,转入到大肠杆菌Ε.coliBL21(DE3)中,得到重组菌株。然后通过改变诱导温度、诱导浓度以及诱导时间等条件来优化HEL在大肠杆菌Ε.coliBL21(DE3)中的表达条件,通过SDS-PAGE电泳分析,确定了最佳表达条件:37℃、0.4mmol/LIPTG诱导8h。按最佳条件于诱导前加入13C6-酪氨酸进行选择性标记,扩大表达,经过变复

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