适用于大豆的CRISPR/Cas9体系的构建

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为了验证不同靶点的突变效率以及鉴定突变类型,本试验在基因GmFAD2-1(g3)、GmFAD2-2b(g6)的第一、第二外显子处分别设计两对靶点,通过体外活性检测,目的为了验证各个靶点的活性,并分别构建不同靶点的基因编辑载体,利用发根农杆菌转化法进一步验证其突变的效率及类型。结果表明:设计在基因第一个外显子区域的靶点,活性明显高于其他位置处设计的靶点;设计的靶点中GC的含量分别为52.6%、36.8%、31.5%、21.1%,说明GC含量越高,靶点的活性越强;通过发根农杆菌介导法快速验证不同靶点的突变效率,以U6为启动子的g3-Target1突变效率为92%,突变类型主要是碱基的插入、缺失、替换;g3-Target2突变效率为36%,突变类型主要是碱基的插入、缺失。以U6为启动子的g6-Target1突变效率为84%,突变类型主要是碱基的插入、缺失、替换;g6-Target2突变效率为8%,突变类型主要是突变类型主要是碱基的插入、缺失。
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