大鼠肌细胞生成素基因的克隆

来源 :中华手外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chengchao5618
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目的设计特异引物克隆大鼠肌细胞生成素(myogenin)的cDNA.方法用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)合成myogenin cDNA;经提纯后,连接到克隆载体pGEM-T,形成重组的克隆载体pGEMT-myogenin. pGEMT-myogenin转化大肠杆菌Ecoli.DH5α内扩增;提取、纯化的pGEMT-myogenin, 经酶切、PCR鉴定及DNA测序,来判断所克隆myogenin cDNA的正确性.结果 RT-PCR产物经凝胶电泳鉴定,含有大小正确的DNA 片段;提取、纯化的pGEMT-myogenin质粒经限制性内切酶酶切、PCR鉴定,含有大小正确的DNA片段,且该片段含有所设计的酶切位点.DNA测序结果证实所克隆的myogenin cDNA序列正确.结论该研究成功地克隆了myogenin cDNA.

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