【摘 要】
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目的: 克隆并构建含人白介素12(hIL-12)基因p35、 p40不同亚基的真核表达载体, 瞬时转染真核细胞并诱导IL-12的表达.方法: 人单核细胞白血病细胞株(THP-1)和人白血病细胞株(H
【机 构】
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四川大学华西医学中心基础与法医学院感染与免疫研究室
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目的: 克隆并构建含人白介素12(hIL-12)基因p35、 p40不同亚基的真核表达载体, 瞬时转染真核细胞并诱导IL-12的表达.方法: 人单核细胞白血病细胞株(THP-1)和人白血病细胞株(HL-60), 经DMSO、 IFN-γ和LPS诱导后, 用RT-PCR及SOE PCR扩增IL-12 p40、 p35及p40-p35融合基因; 并构建pcDNA-p35、 pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达载体.以3种重组质粒分别瞬时转染COS-7细胞后, 通过RT-PCR及ELISA法检测目的基因的表达.结果: 经诱导后, 从HL-60细胞中扩增到IL-12 p40和p35基因片段; 但从THP-1细胞中只扩增到p35基因片段, 未能扩增到p40基因片段; 经酶切鉴定、 PCR扩增及序列测定表明pcDNA-p35、 pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达质粒构建成功; 并在COS-7细胞中可检测到IL-12的表达.结论: 含hIL-12基因不同亚基的真核表达质粒的成功构建, 对进一步研究IL-12在免疫应答中的调节作用以及作为免疫佐剂改善BCG免疫保护效果的研究奠定了基础.
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