探讨肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）抑制剂CRM197对卵巢上皮性癌（卵巢癌）紫杉醇耐药的逆转作用及可能机制。
方法（1）四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测CRM197作用后卵巢癌紫杉醇耐药细胞系A2780/Taxol细胞对紫杉醇的50%抑制浓度（IC50）；蛋白印迹法及实时PCR技术分别检测CRM197作用后A2780/Taxol细胞中HB-EGF、表皮生长因子受体（EGFR）、P糖蛋白（P-gp）蛋白及多药耐药基因（MDR1）mRNA的表达。（2）构建MDR1小分子RNA（siRNA）质粒并转染A2780/Taxol细胞，实验分为4组，即空载体组、MDR1 siRNA组、空载体+CRM197组、MDR1 siRNA+CRM197组，检测4组A2780/Taxol细胞中P-gp功能[以P-gp的底物若丹明123（Rh123）的荧光强度表示]和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白活性[以4硝基苯胺（pNA）浓度表示]。（3）建立卵巢癌A2780/Taxol细胞的裸鼠移植瘤模型，免疫组化SP法检测CRM197作用后裸鼠移植瘤组织中EGFR和P-gp蛋白的表达。
结果（1）MTT比色法检测显示，CRM197作用后A2780/Taxol细胞对紫杉醇的IC50为（6.4±0.3）μmol/L，明显低于未经CRM197作用的A2780/Taxol细胞[（34.1±0.5）μmol/L；P<0.01]，CRM197对紫杉醇的耐药逆转倍数为5.3。蛋白印迹法检测显示，CRM197作用后A2780/Taxol细胞中HB-EGF、EGFR、P-gp蛋白的表达水平（分别为1.44±0.29、0.71±0.25、0.82±0.19）均明显低于未经CRM197作用的A2780/Taxol细胞（分别为2.72±0.32、1.87±0.31、1.84±0.27，P均<0.05）；实时PCR技术检测显示，CRM197作用后A2780/Taxol细胞中MDR1 mRNA的表达水平（0.79±0.13）也明显低于未经CRM197作用的A2780/Taxol细胞（1.78±0.27，P<0.05）。（2）空载体组、MDR1 siRNA组、空载体+CRM197组、MDR1 siRNA+CRM197组A2780/Taxol细胞中的Rh123平均荧光强度分别为33.4±1.6、56.3±3.3、43.5±3.1、100.4±7.4，细胞中pNA浓度分别为（11.4±1.2）、（52.8±0.9）、（71.2±3.6）、（82.7±3.8）μmol/L，上述指标均为MDR1 siRNA+CRM197组高于空载体+CRM197组，空载体+CRM197组、MDR1 siRNA组均高于空载体组，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）免疫组化SP法检测显示，CRM197作用后的A2780/Taxol细胞裸鼠移植瘤组织中EGFR、P-gp蛋白的表达水平分别为（4.4±1.4）、（3.8±1.1）分，明显低于未经CRM197作用的A2780/Taxol细胞裸鼠移植瘤组织[分别为（10.2±3.1）、（8.8±2.7）分，P<0.05]。
结论HB-EGF抑制剂CRM197可逆转卵巢癌紫杉醇耐药，其作用机制可能与CRM197抑制EGFR/MDR1/P-gp通路、增加caspase-3活性，从而促进耐药细胞凋亡相关。