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目的:建立农杆菌介导的马尔尼菲青霉(PM)基因转化技术,并对该技术条件进行优化。方法以二元质粒pDHt/ SK 为载体,通过农杆菌介导将 pyrG 基因插入马尔尼菲青霉尿嘧啶缺陷株 SPM4(pyrG,niaD)中,在不含尿嘧啶的培养基中筛选阳性转化子。运用 PCR 验证重组子。进一步对影响转化效率的农杆菌类型、共培养浓度、转化媒介、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)等六个条件进行优化。结果 PCR 验证 pyrG 基因成功的插入 SPM4中,所得到转化子可稳定传代,通过条件优化,得到转化子约30