【摘 要】
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目的 观察参灵抗癌方(SLKAF)逆转胃癌细胞失巢凋亡抵抗作用,并从磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)调控Bcl-2细胞死亡调解子抗体(Bim)表达为切入点探讨其作用机
【机 构】
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福建中医药大学中医学院 福州350122
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目的 观察参灵抗癌方(SLKAF)逆转胃癌细胞失巢凋亡抵抗作用,并从磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)调控Bcl-2细胞死亡调解子抗体(Bim)表达为切入点探讨其作用机制.方法 采用梯度剂量的SLKAF(0,1,2,4,8,16 mg/mL)与SGC-7901胃癌细胞共培养,MTT法检测胃癌细胞活力,GraphPad Prism7.0计算半数抑制浓度(IC50),并以1×IC50 、2×IC50分别作为SLKAF干预SGC-7901细胞的低剂量和高剂量.运用RNA干扰技术将Bim-siRNA转染SGC-7901细胞,qPCR技术检测Bim表达,观察对Bim表达的抑制效率;以SLKAF低、高剂量分别与SGC-7901细胞和经Bim-siRNA转染的SGC-7901细胞共培养,分别采用qPCR和Western Blot检测PI3K、AKT的表达,流式细胞技术检测细胞凋亡率,软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力.结果 SLKAF对SGC-7901细胞增殖有显著的抑制作用(P＜0.01),并呈明显的量—效应关系,IC50为7.626 mg/mL,故确定8、16 mg/mL分别作为低剂量和高剂量.Bim-siRNA转染SGC-7901细胞可抑制Bim表达(P＜0.05).SLKAF高、低剂量均降低SGC-7901细胞PI3K、AKT表达(P＜0.05,P＜0.01),提高胃癌细胞凋亡率(P＜0.05,P＜0.01),降低胃癌细胞克隆形成能力(P＜0.01);与低剂量比较,高剂量SLKAF作用下的SGC-7901细胞/经Bim-siRNA转染的SGC-7901细胞表达PI3K、AKT均降低(P＜0.01),胃癌细胞凋亡率升高(P＜0.05),细胞克隆形成数降低(P＜0.05);在SLKAF相同剂量下,SGC-7901细胞和经Bim-siRNA转染的SGC-7901细胞表达PI3K、AKT比较,差异无统计学意义(P＞0.05),但细胞凋亡率和细胞克隆形成能力差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 SLKAF经PI3K/AKT调控Bim表达逆转胃癌细胞失巢凋亡抵抗.
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