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目的建立体外稳定过表达酸敏感离子通道1a（ASIC1a）的Fisher大鼠甲状腺上皮细胞（FRT细胞）,采用Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测〔乳酸脱氢酶（LDH）释放法〕测定ASIC1a活性,探讨高通量筛选ASIC1a抑制剂的可行性。方法2014年1月—2016年2月,利用分子生物学方法,构建ASIC1a过表达载体pc DNA3.1/myc-His-m ASIC1a,通过细胞转染技术建立了稳定过表达ASIC1a的Fisher大鼠FRT细胞。将细胞分成两组,对照组（FRT细胞）和实验组（稳定过表达ASIC1a的FRT细胞）,并分别未负载和负载Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM,采用酶标检测仪测定双波长（340 nm和380 nm）的值,计算F340/F380。对照组和实验组细胞经不同p H值酸液（p H值7.5、7.0、6.5、6.0、5.5）刺激后,采用酶标检测仪测定450 nm波长处LDH释放量。结果对照组与实验组未负载Fura-2/AM细胞F340/F380比较,差异无统计学意义（P>0.05）;实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较对照组升高（P<0.05）;对照组和实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较未负载Fura-2/AM细胞升高（P<0.05）。p H值6.5、6.0、5.5时,实验组细胞LDH释放量大于对照组（P<0.05）;对照组和实验组细胞不同p H值时LDH释放量比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论本研究成功建立稳定过表达ASIC1a的FRT细胞,Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测（LDH释放法）两种方法测定ASIC1a活性,使高通量筛选ASIC1a抑制剂成为可能,为发现高选择性和高活性的天然小分子ASIC1a抑制剂奠定了基础。