【摘 要】
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利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Cry毒素基因培育转基因抗虫作物品种,为蛋白质杀虫材料的应用带来巨大示范效应.昆虫类钙粘蛋白是Cry毒素的潜在受体之一,开展
【机 构】
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南京农业大学植物保护学院,南京,210095江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所,南京,210014;南京农业大学植物保护学院,南京210095;江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所,南京
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利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Cry毒素基因培育转基因抗虫作物品种,为蛋白质杀虫材料的应用带来巨大示范效应.昆虫类钙粘蛋白是Cry毒素的潜在受体之一,开展受体结合筛选测定,对新型杀虫蛋白材料的筛选和创制具有重要意义.本研究以纯化的稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)类钙粘蛋白毒素结合区域(toxin binding region,TBR)蛋白作为抗原,利用噬菌体展示技术从人(Homo sapiens)源化噬菌体单域抗体库中筛选抗稻纵卷叶螟类钙粘蛋白的单域抗体.采用负筛选的策略,经4轮吸附-洗脱-扩增,富集特异性识别TBR蛋白的噬菌体单域抗体.从第4轮筛选中随机挑取单菌落进行单克隆ELISA鉴定,获得4个含有完整单域抗体基因片段的阳性克隆;对阳性克隆进行测序和序列比对,最终获得3个序列不同的阳性克隆(B4,C11和E8).通过Western blot和ELISA结合试验进行的鉴定结果显示,筛选获得的3株阳性克隆与稻纵卷叶螟类钙粘蛋白均具有较高的结合活性.竞争抑制试验表明,100μg/mL Cry1Ac对C11与稻纵卷叶螟TBR蛋白结合能力可产生28.6％的抑制.本研究利用噬菌体展示技术筛选获得抗稻纵卷叶螟类钙粘蛋白的噬菌体单域抗体并验证其生物活性,为进一步开拓具有Cry毒素功能活性和生物活性的模拟物提供了材料基础.
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