猪流行性腹泻病毒E基因真核表达载体的构建与鉴定

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(目的)构建猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)E基因真核表达载体pCI—E,为探讨E基因的功能奠定基础。(方法)根据GenBank上已发表的PEDVCV777株序列,利用Primer5.0设计1对两端含限制性核酸内切酶EcoRI和SalI酶切位点的特异引物,用反转录聚合酶链式反应(RT—PCR)扩增出完整的231bp的目的基因,将目的基因与pMD19-T载体连接转化到大肠杆菌DH5a中,用测序、PCR、双酶切鉴定阳性克隆体。然后将纯化后的E基因插入
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