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  5. 新型EGFP标记的杆状病毒转移载体的构建及EGFP的制备

新型EGFP标记的杆状病毒转移载体的构建及EGFP的制备

来源 :西安交通大学学报：医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：cainubaijiazi
【摘 要】
：
目的构建可表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体，利用Sf-9细胞表达、制备EGFP。方法用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因，NcoⅠ／SalⅠ双酶切，克隆入杆状病毒
【作 者】
：
杨军 王一理 司履生 
【机 构】
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西安交通大学医学院第二附属医院病理科,西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所
【出 处】
：
西安交通大学学报：医学版
【发表日期】
：
2006年5期
【关键词】
：
昆虫杆状病毒表达系统 增强型绿色荧光蛋白 baculovirus expression system enhanced green fluorescent pr 
【基金项目】
：
国家自然科学基金资助项目（No.30300305）
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目的构建可表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体，利用Sf-9细胞表达、制备EGFP。方法用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因，NcoⅠ／SalⅠ双酶切，克隆入杆状病毒转移载体Nco-Ⅰ／SalⅠ酶切位点之间，获得pFB-EGFP质粒；转化E．coli DH10Bac，通过转座子Tn7的介导，获得重组杆状病毒Ac-EGFP；感染Sf-9昆虫细胞；利用激光共聚焦显微镜和SDS-PAGE观察并检测EGFP的表达。非变性法纯化EGFP。结果荧光显微镜和激光共聚焦显微镜证实感染的
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