探讨人腺苷酸活化蛋白激酶5(ARK5)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体的构建及其对人胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响。
方法以人ARK5 mRNA编码序列为干扰靶点，设计3条沉默ARK5的特异性短发卡RNA(shRNA)，构建重组慢病毒表达载体，转染人胃癌SGC7901细胞。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测ARK5基因的沉默效果，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell法检测细胞侵袭能力，流式细胞仪检测葡萄糖饥饿和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导处理对细胞凋亡的影响。
结果测序结果证明，RNAi重组慢病毒载体ARK5-shRNA-3构建成功。实时荧光定量PCR检测显示，正常对照组、阴性对照组和ARK5-shRNA-3转染组的ARK5基因表达水平分别为1.002±0.082、1.001±0.050和0.140±0.003。ARK5-shRNA-3转染组与正常对照组、阴性对照组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。细胞划痕实验显示，ARK5-shRNA-3转染组的细胞迁移率为(38.5±4.3)%，而正常对照组和阴性对照组的细胞迁移率分别为(72.4±6.4)%和(75.1±7.1)%，差异有统计学意义(P<0.01)。Transwell检测结果显示，正常对照组、阴性对照组和ARK5-shRNA-3转染组的穿膜细胞数分别为(257.4±12.3)个、(245.7±11.6)个、(112.5±7.8)个，ARK5-shRNA-3转染组与正常对照组、阴性对照组差异有统计学意义(P<0.01)。在葡萄糖饥饿和TNF-α处理24 h后，正常对照组、阴性对照组和ARK5-shRNA-3转染组的细胞凋亡率分别为(11.7±3.2)%、(12.3±2.6)%和(30.8±4.3)%，ARK5-shRNA-3转染组与正常对照组、阴性对照组差异有统计学意义(P<0.01)。
结论成功构建了能高效沉默ARK5基因的重组慢病毒表达载体，并且明显地抑制了胃癌细胞增殖、迁移和侵袭，促进了胃癌细胞在饥饿胁迫及TNF-α诱导情况下的凋亡。