【摘 要】
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目的探讨蛋白激酶C(PKC)-核因子κB(NF-κB)信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法体外培养HPASMCs,用工具药PKC激活剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)和NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC),将HPASMCs分为对照组、PMA组和PMA+PDTC组在常氧和缺氧条件下培养.逆转录-聚合酶链反应(RT-
【机 构】
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430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科,,,,
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目的探讨蛋白激酶C(PKC)-核因子κB(NF-κB)信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.
方法体外培养HPASMCs,用工具药PKC激活剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)和NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC),将HPASMCs分为对照组、PMA组和PMA+PDTC组在常氧和缺氧条件下培养.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA表达,Western blot法检测VEGF和NF-κB的抑制蛋白IκBα蛋白表达,免疫细胞化学法检测NF-κB p65的表达和定位,流式细胞术检测细胞周期时相分布.
结果(1)NF-κB p65胞核染色阳性率、IκBα蛋白相对表达量及细胞周期G2/M%:常氧或缺氧PMA组与相应对照组、PMA+PDTC组比较差异均有显著性(P均<0.05);缺氧PMA组与常氧PMA组比较差异有显著性(P<0.05).(2)VEGF mRNA和蛋白表达:常氧对照组、PMA组、PMA+PDTC组组间差异均无显著性(P均>0.05);缺氧PMA组均高于缺氧对照组、缺氧PMA+PDTC组、常氧PMA组,差异均有显著性(P均<0.05).(3)缺氧PMA组NF-κB胞核染色阳性率、VEGF蛋白相对表达量、G2/M%之间均呈正相关(r=0.587～0.710,P均<0.05).
结论常氧培养HPASMCs存在PKC-NF-κB信号转导通道;缺氧培养HPASMCs 增殖与PKC激活、NF-κB活化和VEGF高表达有关.提示NF-κB活化是HPASMCs PKC信号转导通道的下游事件,缺氧时HPASMCs PKC-NF-κB信号转导通道激活和VEGF高表达可能参与缺氧性肺动脉高压的形成.
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