论文部分内容阅读
摘 要：目的：研究并验证HPLC法检查孟鲁司特钠片的含量测定方法。方法：采用苯基硅烷键合硅胶色谱柱；以0.15%三氟乙酸溶液-0.15%三氟乙酸乙腈溶液（45：55）为流动相；检测波长为238nm。结果：方法的专属性、准确度、精密度及耐用性良好；在孟鲁司特钠的进样量为0.424μg～4.24μg范围内，进样浓度与色谱峰面积线性关系良好，平均回收率為99.53%，RSD为1.13%（n=9）。结论：本方法简便、快速、灵敏，可有效检测孟鲁司特钠片的含量。
关键词：孟鲁司特钠；含量测定；HPLC
孟鲁司特钠，由默沙东公司研发、生产，并于1999年，获得中国国家食品药品监督管理局批准正式上市，是一种口服的白三烯受体拮抗剂，能特异性抑制气道中的半胱氨酰白三烯（CysLT1）受体，从而达到改善气道炎症，有效控制哮喘症状，适用于成人和1岁以上儿童哮喘的预防和长期治疗及过敏性鼻炎的治疗，根据我国《支气管哮喘防治指南》2008年版推荐可单独应用的长期控制药，可作为轻度哮喘的替代治疗药物和中重度哮喘的联合治疗用药。
国家药典委员会发布了孟鲁司特钠片的国家标准征求意见稿，标准中采用高效液相色谱法检测孟鲁司特钠片中孟鲁司特的含量，本研究将对该方法进行详细的方法学研究，以判断该方法是否适合于孟鲁司特钠片产品质量控制。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪（安捷伦1200）；色谱柱：硅胶色谱柱；孟鲁司特钠片（批号：160101、160102、160103，实验室自制）；孟鲁司特二环己胺盐对照品（含量为100%），购自中检所。
甲醇、乙腈均为色谱级；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
本品的含量检查方法参照国家药典委员发布的孟鲁司特钠片标准征求意见稿中色谱条件进行。
2.1 色谱条件
色谱柱：苯基硅烷键合硅胶色谱柱；以0.15%三氟乙酸溶液-0.15%三氟乙酸乙腈溶液（45：55）为流动相；检测波长为238nm；流速：1.0ml/min；进样量20μl。
2.2 供试品溶液的制备
取本品片20片，精密称定， 研细，精密称取适量（约相当于孟鲁司特10mg），加入到100ml的量瓶中，加入90%甲醇溶液适量， 超声约15分钟使孟鲁司特钠溶解，用90%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备
取孟鲁司特二环己胺盐对照品适量，精密称定，加入适宜的量瓶内，用90%甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含孟鲁司特0.1μg的溶液，振摇使混合均匀，作为对照品溶液。
2.4 专属性实验
按照处方量精密称量本品中的辅料，按照供试品溶液的配制、稀释方法配制辅料空白溶液，精密量取20μl注入色谱仪，记录色谱图。
结果：辅料和溶剂在孟鲁司特出峰处无干扰。
2.7 溶液稳定性试验
取供试品溶液分别于0、1、2、4、6小时进样，考察各个时间点溶液中孟鲁司特峰峰面积的RSD%，验证孟鲁司特供试品溶液的稳定性。
结果：孟鲁司特峰面积6小时内RSD为0.8%，结果表明孟鲁司特钠含量测定溶液在6小时内稳定性良好。
2.8 线性试验
精密称取孟鲁司特二环己胺盐对照品适量，分别配制成每1ml分别含孟鲁司特浓度约为20μg、75μg、100μg、150μg、200μg的对照品溶液，分别进样20μl，记录谱图。以孟鲁司特的峰面积为纵坐标，以孟鲁司特二环己胺盐对照品的进样量为横坐标，计算线性回归方程及线性相关系数。
结果：孟鲁司特线性方程为：y=4258708x-100257，r=0.9999；表明该方法孟鲁司特进样量在0.424μg～4.24μg范圍内均线性关系良好。
2.9 定量限试验
取2.8项下的对照品溶液进一步稀释，精密量取20μl注入高效液相色谱仪，以信噪比10：1时浓度计算进样量为检测限。
结果：将2.8项下浓度最低的对照品溶液稀释适宜的倍数后，当其色谱峰信噪比即约为10：1时，由该溶液的浓度计算出孟鲁司特钠的检测限为4.24ng。
2.10 回收率试验
取本品辅料适量，按照处方配比称量各辅料9份，分成3组，置100ml容量瓶内，分别精密加入孟鲁司特二环己胺盐对照品适量，按照供试品溶液稀释方法配制，使每1ml溶液中含孟鲁司特二环己胺盐对照品的加入量分别为40μg、50μg、60μg，并按照规定的方法分别配制对照品溶液，量取以上各溶液20μl，按照以上检测条件分别进样检测，记录谱图，计算回收率。
结果：平均回收率为99.53%，RSD为1.13%，说明本方法耐用性较好。
2.11 中间精密度试验
取孟鲁司特钠片样品，按照标准中规定的方法配制孟鲁司特钠对照品溶液和供试品溶液，分别由不同人员、不同仪器、不同日期按照规定的检测条进样检测，记录谱图，计算RSD%。
结果：不同人员、不同仪器、不同日期分别检测孟鲁司特含量结果间RSD为1.70%，表明本方法中间精密度良好。
2.12 重复性试验
取孟鲁司特钠片样品，按照标准中规定的方法配制孟鲁司特钠对照品溶液和供试品溶液各6份，按照规定的检测条进样检测，记录谱图，计算RSD%。
结果：孟鲁司特钠片6次含量测定结果间RSD为0.97%，表明本方法重复性良好。
2.13 耐用性试验
取孟鲁司特钠片样品，按照规定的方法配制孟鲁司特钠对照品溶液和供试品溶液，调整流动相比例分别为40：60，45：55，50：50；分别调整流动相的流速为1.0ml/min、0.8ml/min、1.2ml/min；检测波长分别为238nm、236nm、240nm；分别精密量取以上各溶液20μl，按照以上检测条件分别进样检测，记录谱图，考察耐用性。
结果：液相各检测条件轻微改变后，孟鲁司特钠片含量测定结果无明显差异，说明本方法耐用性较好。
2.14 孟鲁司特钠片含量测定
取三批样品，检查孟鲁司特钠片含量，结果三批含量结果分别为100.48%、100.11%、100.23%。
3 讨论
本品的含量测定参照国家药典委员会孟鲁司特钠片标准征求意见稿中方法进行检查。方法学验证结果表明，方法的专属性、准确度、中间精密度、重复性、耐用性较好，检测灵敏度较高。该方法简便、快捷，可准确检测孟鲁司特钠片的含量。
参考文献：
[1] 国家药典委员会，孟鲁司特钠片标准征求意见稿.
关键词：孟鲁司特钠；含量测定；HPLC
孟鲁司特钠，由默沙东公司研发、生产，并于1999年，获得中国国家食品药品监督管理局批准正式上市，是一种口服的白三烯受体拮抗剂，能特异性抑制气道中的半胱氨酰白三烯（CysLT1）受体，从而达到改善气道炎症，有效控制哮喘症状，适用于成人和1岁以上儿童哮喘的预防和长期治疗及过敏性鼻炎的治疗，根据我国《支气管哮喘防治指南》2008年版推荐可单独应用的长期控制药，可作为轻度哮喘的替代治疗药物和中重度哮喘的联合治疗用药。
国家药典委员会发布了孟鲁司特钠片的国家标准征求意见稿，标准中采用高效液相色谱法检测孟鲁司特钠片中孟鲁司特的含量，本研究将对该方法进行详细的方法学研究，以判断该方法是否适合于孟鲁司特钠片产品质量控制。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪（安捷伦1200）；色谱柱：硅胶色谱柱；孟鲁司特钠片（批号：160101、160102、160103，实验室自制）；孟鲁司特二环己胺盐对照品（含量为100%），购自中检所。
甲醇、乙腈均为色谱级；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
本品的含量检查方法参照国家药典委员发布的孟鲁司特钠片标准征求意见稿中色谱条件进行。
2.1 色谱条件
色谱柱：苯基硅烷键合硅胶色谱柱；以0.15%三氟乙酸溶液-0.15%三氟乙酸乙腈溶液（45：55）为流动相；检测波长为238nm；流速：1.0ml/min；进样量20μl。
2.2 供试品溶液的制备
取本品片20片，精密称定， 研细，精密称取适量（约相当于孟鲁司特10mg），加入到100ml的量瓶中，加入90%甲醇溶液适量， 超声约15分钟使孟鲁司特钠溶解，用90%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液的制备
取孟鲁司特二环己胺盐对照品适量，精密称定，加入适宜的量瓶内，用90%甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含孟鲁司特0.1μg的溶液，振摇使混合均匀，作为对照品溶液。
2.4 专属性实验
按照处方量精密称量本品中的辅料，按照供试品溶液的配制、稀释方法配制辅料空白溶液，精密量取20μl注入色谱仪，记录色谱图。
结果：辅料和溶剂在孟鲁司特出峰处无干扰。
2.7 溶液稳定性试验
取供试品溶液分别于0、1、2、4、6小时进样，考察各个时间点溶液中孟鲁司特峰峰面积的RSD%，验证孟鲁司特供试品溶液的稳定性。
结果：孟鲁司特峰面积6小时内RSD为0.8%，结果表明孟鲁司特钠含量测定溶液在6小时内稳定性良好。
2.8 线性试验
精密称取孟鲁司特二环己胺盐对照品适量，分别配制成每1ml分别含孟鲁司特浓度约为20μg、75μg、100μg、150μg、200μg的对照品溶液，分别进样20μl，记录谱图。以孟鲁司特的峰面积为纵坐标，以孟鲁司特二环己胺盐对照品的进样量为横坐标，计算线性回归方程及线性相关系数。
结果：孟鲁司特线性方程为：y=4258708x-100257，r=0.9999；表明该方法孟鲁司特进样量在0.424μg～4.24μg范圍内均线性关系良好。
2.9 定量限试验
取2.8项下的对照品溶液进一步稀释，精密量取20μl注入高效液相色谱仪，以信噪比10：1时浓度计算进样量为检测限。
结果：将2.8项下浓度最低的对照品溶液稀释适宜的倍数后，当其色谱峰信噪比即约为10：1时，由该溶液的浓度计算出孟鲁司特钠的检测限为4.24ng。
2.10 回收率试验
取本品辅料适量，按照处方配比称量各辅料9份，分成3组，置100ml容量瓶内，分别精密加入孟鲁司特二环己胺盐对照品适量，按照供试品溶液稀释方法配制，使每1ml溶液中含孟鲁司特二环己胺盐对照品的加入量分别为40μg、50μg、60μg，并按照规定的方法分别配制对照品溶液，量取以上各溶液20μl，按照以上检测条件分别进样检测，记录谱图，计算回收率。
结果：平均回收率为99.53%，RSD为1.13%，说明本方法耐用性较好。
2.11 中间精密度试验
取孟鲁司特钠片样品，按照标准中规定的方法配制孟鲁司特钠对照品溶液和供试品溶液，分别由不同人员、不同仪器、不同日期按照规定的检测条进样检测，记录谱图，计算RSD%。
结果：不同人员、不同仪器、不同日期分别检测孟鲁司特含量结果间RSD为1.70%，表明本方法中间精密度良好。
2.12 重复性试验
取孟鲁司特钠片样品，按照标准中规定的方法配制孟鲁司特钠对照品溶液和供试品溶液各6份，按照规定的检测条进样检测，记录谱图，计算RSD%。
结果：孟鲁司特钠片6次含量测定结果间RSD为0.97%，表明本方法重复性良好。
2.13 耐用性试验
取孟鲁司特钠片样品，按照规定的方法配制孟鲁司特钠对照品溶液和供试品溶液，调整流动相比例分别为40：60，45：55，50：50；分别调整流动相的流速为1.0ml/min、0.8ml/min、1.2ml/min；检测波长分别为238nm、236nm、240nm；分别精密量取以上各溶液20μl，按照以上检测条件分别进样检测，记录谱图，考察耐用性。
结果：液相各检测条件轻微改变后，孟鲁司特钠片含量测定结果无明显差异，说明本方法耐用性较好。
2.14 孟鲁司特钠片含量测定
取三批样品，检查孟鲁司特钠片含量，结果三批含量结果分别为100.48%、100.11%、100.23%。
3 讨论
本品的含量测定参照国家药典委员会孟鲁司特钠片标准征求意见稿中方法进行检查。方法学验证结果表明，方法的专属性、准确度、中间精密度、重复性、耐用性较好，检测灵敏度较高。该方法简便、快捷，可准确检测孟鲁司特钠片的含量。
参考文献：
[1] 国家药典委员会，孟鲁司特钠片标准征求意见稿.