斑马鱼ANF基因的克隆及多克隆抗体的制备

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心房钠尿肽ANF是钠尿肽家族中的~员,是心肌细胞分泌的-种循环激素,主要在心房组织分泌。生物信息学分析表明,斑马鱼AⅣF基因开放阅读框全长321bp,编码106个氨基酸,PCR扩增获得斑马鱼ANF基因全长。将所得的PCR片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并将重组质粒(pGEX-4T—1-ANF)转化大肠杆菌BL21。通过IPTG诱导表达GST—ANF融合蛋白,经GST亲和层析法纯化后,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,Western blotting分析表明,制备的抗体具有良好的高效价性和特异性。
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