论文部分内容阅读
目的探讨抗血管生成药物阿帕替尼与常用化疗药物阿霉素联合应用对外周T细胞淋巴瘤Hut78细胞株的抑制作用以及相关分子作用机制,为开发外周T细胞淋巴瘤治疗新方法提供实验依据。方法将Hut78细胞分为不同浓度药物处理组:阿帕替尼单药(10、20、40、60μmol·L-1)、阿霉素单药(1、2、4μmol·L-1)、阿帕替尼+阿霉素[（40+1）μmol·L-1、（40+2）μmol·L-1、（60+1）μmol·L-1、（60+2）μmol·L-1],分别作用72 h,采用CCK-8法检测药物对细胞的增殖抑制作用。采用流式细胞术检测不同浓度药物处理组{阿帕替尼单药(40μmol·L-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L-1)、阿帕替尼+阿霉素[（40+1）μmol·L-1、（40+2）μmol·L-1]}作用24 h后对Hut78细胞凋亡的影响。采用流式细胞术检测不同浓度阿帕替尼(10、20、40μmol·L-1)作用24 h后对Hut78细胞周期的影响。采用蛋白印迹法检测不同浓度药物处理组{阿帕替尼单药(40μmol·L-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L-1)、阿帕替尼+阿霉素[（40+1）μmol·L-1、（40+2）μmol·L-1]}作用24 h后,Hut78细胞中PI3K/Akt信号转导通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt及凋亡相关蛋白Bcl-2、Casepase-3、Bax的表达变化。结果不同浓度(10、20、40、60μmol·L-1)的阿帕替尼作用72 h后,细胞抑制率分别为（13.42±2.19）%、（19.52±4.16）%、（31.49±3.16）%、（52.88±3.37）%,72 h的IC50值为（59.34±0.31）μmol·L-1,各药物处理组与对照组两两比较,差异具有统计学意义（χ2=10.116,P=0.018）;不同浓度(1、2、4μmol·L-1)的阿霉素分别作用72 h后,细胞抑制率分别为（15.82±3.23）%、（31.70±4.79）%、（42.34±5.23）%,72 h的IC50值为（5.52±0.18）μmol·L-1,各药物处理组与对照组两两比较,差异具有统计学意义（χ2=10.532,P=0.015）;阿帕替尼+阿霉素[（40+1）μmol·L-1、（40+2）μmol·L-1、（60+1）μmol·L-1、（60+2）μmol·L-1]作用72 h的细胞抑制率分别为（51.70±2.09）%、（56.62±4.83）%、（61.35±1.79）%、（65.13±3.88）%。两药的联合指数（CI）<1,说明二者具有药物协同作用。阿帕替尼单药(40μmol·L-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L-1)作用24 h的细胞凋亡率分别为（15.65±0.75）%、（13.85±2.15）%、（23.60±1.30）%,阿帕替尼+阿霉素[（40+1）μmol·L-1、（40+2）μmol·L-1]作用24h的细胞凋亡率分别为（27.00±1.90）%、（33.20±2.30）%,各药物处理组与对照组[（6.10±0.90）%]比较,差异有统计学意义（χ2=16.251,P=0.006）。不同浓度(10、20、40μmol·L-1)的阿帕替尼作用24 h后,G0/G1期细胞比例随浓度升高而升高[（49.27±0.45）%、（50.34±1.24）%、（59.16±1.23）%],S期细胞比例随浓度升高而降低[（42.81±2.22）%、（39.19±2.71）%、（34.08±1.01）%],各药物处理组与空白对照组[G0/G1期（39.26±0.65）%,S期（49.40±2.52）%]比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。阿帕替尼单药(40μmol·L-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L-1)以及阿帕替尼+阿霉素[（40+1）μmol·L-1、（40+2）μmol·L-1]作用24 h后,PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、p-Akt和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平呈下降趋势,促凋亡蛋白Casepase-3和Bax的表达水平呈上升趋势,Akt蛋白的表达水平无明显变化,各药物处理组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2、Casepase-3及Bax蛋白表达水平与对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论阿帕替尼可抑制外周T细胞淋巴瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,同时具有细胞周期阻滞作用,其作用可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路激活实现的。阿帕替尼联合阿霉素对外周T细胞淋巴瘤细胞具有协同抑制作用。