【摘 要】
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目的 构建GST-hVinexin融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法 从COS-7细胞中提取mRNA,反转录为cDNA.用PCR方法扩增出hVinexin基因全长,通过BamHI和SalI酶
【机 构】
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中国医科大学附属盛京医院骨科,中国医科大学附属盛京医院小儿外科,明尼苏达大学实验病理系
【基金项目】
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国家自然科学基金;辽宁省科技厅基金
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目的 构建GST-hVinexin融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法 从COS-7细胞中提取mRNA,反转录为cDNA.用PCR方法扩增出hVinexin基因全长,通过BamHI和SalI酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hVinexin,并转化E.coli DH5 α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定.结果 电泳后酶切结果证实hVinexin大小为990bp,测序证明成功构建了原核表达质粒GST-hVinexin,并诱导表达GST-hVinexin融合蛋白,进一步用Western blot方法验证了其融合蛋白的表达.结论 成功构建了GST-hVinexin原核表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌表达,为进一步纯化Vinexin及研究其结构与功能提供了前提基础.
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