大肠杆菌酒石酸脱氢酶β亚基的克隆、表达、纯化及包涵体的复性

来源 :首都师范大学学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户：guoyh

【摘要】

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利用PCR技术从大肠杆菌BL21中获取酒石酸脱氢酶β亚基基因(TtdB),并将之克隆到质粒pUC18上,转化大肠杆菌DH5α细胞.经测序证明序列无误后,将之与表达载体pTrcHisC连接,在大肠

【作者】

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徐燕李永海刘凤华席慧周霞高音

【机构】

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首都师范大学生命科学学院

【出处】

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首都师范大学学报(自然科学版)

【发表日期】

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2005年03期

【关键词】

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酒石酸脱氢酶β亚基基因克隆诱导表达包涵体复性

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目(No.39800028);北京市科技新星计划项目(No.96128)

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利用PCR技术从大肠杆菌BL21中获取酒石酸脱氢酶β亚基基因(TtdB),并将之克隆到质粒pUC18上,转化大肠杆菌DH5α细胞.经测序证明序列无误后,将之与表达载体pTrcHisC连接,在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和双波长扫描分析,确定酒石酸脱氢酶β亚基在大肠杆菌中表达时以包涵体形式存在.目的蛋白用TALON金属亲和树脂纯化,通过分步透析逐步去除变性剂的方法复性.复性产率可达90%.

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