【摘 要】
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目的 构建淋病奈瑟球菌表面蛋白A(NspA)基因疫苗,并接种小鼠,评价其诱导的体液和细胞免疫应答.方法 将NspA基因插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3
【机 构】
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湖南省人民医院检验科,湖南省衡阳市,湖南环境生物职业技术学院附属医院
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目的 构建淋病奈瑟球菌表面蛋白A(NspA)基因疫苗,并接种小鼠,评价其诱导的体液和细胞免疫应答.方法 将NspA基因插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/NspA,并经PCR、双酶切及测序鉴定.反转录-聚合酶链反应(RT PCR)和免疫组织化学法分别检测NspA基因转染细胞后mRNA和蛋白的表达.以pcDNA3.1(+)/NspA重组质粒免疫45只雄性BALB/c小鼠,试管凝集法检测免疫小鼠抗体滴度,ELISA检测IFN-γ水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测脾淋巴细胞增殖.提取接种部位股四头肌总DNA,PCR检测BALB/c小鼠肌细胞内NspA基因.结果 成功构建pcDNA3.1(+)/NspA基因疫苗,能在真核细胞中转录和表达.pcDNA3.1(+)/NspA免疫组的抗体滴度达1∶640,pcDNA3.1(+)和PBS免疫组均无特异性抗体检出.空载体pcDNA3.1(+)组IFN-γ为(23.79±11.85)pg/mL,pcDNA3.1(+)/NspA免疫组为(169.71±30.52)pg/mL(P＜0.01);脾淋巴细胞增殖的刺激指数(SI)分别为1.05±0.30和1.94±0.74(P＜0.01).并证实NspA基因可在小鼠肌细胞中稳定存在.结论 构建淋病奈瑟球菌NspA基因疫苗,将其免疫BALB/c小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫应答,为进一步用于淋病预防奠定了基础.
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