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【摘要】目的:研究蒙药索布如•札特巴水提取物对催老小鼠的抗氧化作用。方法:索布如•札特巴用蒸馏水超声波辅助提取。1月龄的ICR(InstituteofCancerResearcch,ICR)小鼠分为5组,正常对照组和衰老模型组用生理盐水灌胃,给药组用索布如•札特巴提取物分别以每天16,8,4mg/kg的剂量灌胃,连续灌胃50天后测定小鼠血浆丙二醛(MDA)含量,超氧化歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及肝指数、脾指数等指标。结果:中、高剂量给药组可显著降低血浆MDA水平,增强SOD、GSH-Px的活性,并可抑制小鼠肝指数和脾指数的降低。结论:索布如•札特巴水提取物对催老小鼠有一定的抗氧化作用。
【关键词】抗氧化作用;蒙药;索布如•札特巴
【中图分类号】R29【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)16-183-2
蒙药是我国传统医药的重要组成部分,纯属天然药物。这些药物多数化学成分不明、药理作用不详,仅凭药典、经验使用。要想发展蒙医药学,必须利用现代的科学技术手段,对蒙药进行成分分析,揭示它的生物效应,对其药理及毒理进行研究,找到蒙药独特疗效的科学依据。蒙药索布如•札特巴是由石榴、豆蔻、广枣等8味蒙药材组成。“蒙药正典”中有记载其具有祛寒、除湿等功能。临床上主要用来治疗痰、寒、气三型的心脏病[1]。但迄今未见对其药理学方面的研究报道。本课题组前期研究了索布如•札特巴体外抗氧化活性,发现其水提取物和乙醇提取物都具有良好的体外抗氧化作用[2]。为进一步探讨此药的药理作用,我们采用采用D-半乳糖致亚急性衰老的小鼠模型,检测了索布如•札特巴对催老模型小鼠血浆MDA含量,SOD、GSH-Px活性以及肝指数、脾指数等指标,以期揭示索布如•札特巴抗氧化作用机理。
1材料与方法
1.1材料与仪器
蒙药索布如•札特巴由内蒙古中蒙医院提供。D-半乳糖由上海试剂二厂提供;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试盒由南京建成生物工程研究所提供;实验用水为二次石英亚沸蒸馏水。主要仪器有,LabTechUV1000紫外可见分光光度、KQ3200V型超声波清洗器、FA2104N电子天平等。
1.2提取方法
准确称取样品1.00g于100ml锥形瓶中,加入蒸馏水15ml,浸泡6h,超声辅助提取(12kHz,10min),过滤,滤液用冷冻干燥仪干燥,称重保存。
1.3小鼠衰老模型的建造及给药方法
1月龄的ICR小鼠,体重26±2.1g,雄性,50只,由内蒙古科技大学医学部动物室提供。小鼠在实验室环境下(25℃,湿度65%)适应性饲养1周后随机分为5组,即正常对照组、衰老模型组、给药高、中、低剂量组[3]。除正常对照组外,其余各组小鼠每天皮下注射D-半乳糖1g/kg,持续六周,正常对照组小鼠每天皮下注射等量生理盐水。造模7天后开始,高、中、低剂量组用索布如•札特巴提取物分别以每天16,8,4mg/kg的剂量灌胃,正常对照组及模型组用等量生理盐水灌胃,连续六周。
1.4各种指标的测定方法
实验小鼠于末次给药停药2天后断食12小时。称体重,眼眶取血,肝素抗凝,分离血浆立即进行指标检测。同时迅速取出肝、脾,称重。MDA、SOD及GSH-Px的测定按照试剂盒的说明进行。脏器指数按下式计算:脏器指数=脏器重量(g)/体重(g)·100%。
1.5数据处理
实验数据处理采用SPSS10.0统计软件进行,实验数据用±s表示,采用t检验进行统计学处理,组间比较用单因素方差分析。
2结果
2.1索布如•札特巴提取物对衰老模型小鼠肝指数、脾指数的影响
从表1可以看出,衰老模型组小鼠肝指数与脾指数都降低,肝指数明显低于正常组(P<0.01),而造模7天后开始灌服索布如•札特巴水提取物8,16mg/kg,可显著抑制肝指数的降低(P<0.01),对脾指数的降低也有一定的抑制作用(表1)。
2.2索布如•札特巴提取物对小鼠血浆MDA、SOD、GSH-Px的影响
从表1可看出,模型组小鼠血浆中MDA含量明显高于正常对照组(P<0.01),SOD与GSH-Px活性明显低于正常对照组(P<0.05)。这些结果表明,衰老模型组小鼠体内自由基代谢异常。索布如•札特巴提取物高、中剂量组均能显著降低衰老小鼠血浆中MDA含量(P<0.01),并能显著提高SOD(P<0.05),高剂量组能显著提高GSH-Px活性(P<0.05)。上述结果表明索布如•札特巴可提高机体抗氧化物酶的活力,降低脂质过氧化水平(表1)。
3讨论
D-半乳糖衰老模型是按照衰老的代谢学说建立的,表现出与自然衰老相似的一系列生理生化改变,其主要表现为机体氧化水平明显增加,心肝脑肺脾肾等脏器指数降低[4,5]。
MDA可反映生物膜氧化的程度,通过测定MDA可以间接反应机体氧化水平和老化程度[6]。而抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性是反映机体抗氧化能力的重要指标。SOD能促使超氧化物阴离子自由基变为过氧化氢和氧离子,从而减少脂质过氧化反应,使机体细胞和组织免受损害[7]。GSH-Px是机体重要的催化过氧化氢分解的酶,可起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。本研究发现,衰老模型组血浆MDA值高于正常对照组,而给药组的值低于模型对照组,这说明索布如•札特巴可减轻生物膜的受损程度,维持生物膜的正常功能而起到抗衰老的作用。并且,索布如•札特巴提取物可以抑制D-半乳糖导致的血浆SOD、GSH-Px活性的降低,说明索布如•札特巴可以提高模型血浆中SOD、GSH-Px的活性、清除自由基,具有一定的延缓衰老的作用。
脏器指数是脏器重占体重的百分数。过量注射D-半乳糖会引起糖代谢紊乱,使机体过氧化反应增强,产生大量自由基损害了肝脏,使肝指数发生明显变化[3,4,5]。本实验中模型组小鼠与正常组相比,其肝指数明显降低,而高剂量组均可提高肝指数,表明索布如•札特巴可以降低肝脏的受损程度,保护肝脏。脾脏是机体的免疫器官,脾脏中有T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞,与细胞免疫、体液免疫均有密切关系[3]。模型对照组的脾指數低于正常对照组而索布如•札特巴高剂量组的脾指数高于模型对照组接近正常对照组,说明索布如•札特巴对脾脏也有一定的保护作用。
综上所述,索布如•札特巴提取物中含有有益于健康的抗氧化活性成分,具有良好的抗氧化能力,能在一定程度上延缓由于注射D-半乳糖引起的小鼠体内抗氧化能力的降低。提示索布如•札特巴在抗衰老,防治老年性疾病方面具有重要的应用价值。
参考文献
[1] 武绍新.蒙医成方选[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社,1984:309.
[2] 敖恩宝力格,王金妞,邰丽华.蒙药索布如•札特巴提取物的抗氧化活性研究[J].时珍国医国药,2010,21(5):1153-1154.
[3] 王喆,陆承荣,宋建贞.D-半乳糖亚急性中毒大鼠拟衰老生理生化改变[J].中国比较医学杂志,2003,13(4):236-238.
[4] 徐清萍,陶文沂,敖宗华.食醋对催老小鼠抗氧化活性的影响[J].食品科学,2005,126(12):205-207.
[5] 朱庆磊,杨契,薛桥.人工致衰老和自然衰老小鼠抗氧化能力改变的对比研究[J].中国老年学杂志,2003,23(7):448-450.
[6] 陈瑗,周玖.自由基医学基础与病理生理[M].北京:人民卫生出版社,2002:157-159.
[7] GiardinoR,GiavaresiG,FiniM,etal.Theroleofdifferentchemicalmodificationsofsuperoxidedismutaseinpreventingaprolongedmuscularischemia/reperfusioninjury[J].ArtifCellsBloodSubstitImmobilBiotechnol,2002,30(3):189-198.
【关键词】抗氧化作用;蒙药;索布如•札特巴
【中图分类号】R29【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)16-183-2
蒙药是我国传统医药的重要组成部分,纯属天然药物。这些药物多数化学成分不明、药理作用不详,仅凭药典、经验使用。要想发展蒙医药学,必须利用现代的科学技术手段,对蒙药进行成分分析,揭示它的生物效应,对其药理及毒理进行研究,找到蒙药独特疗效的科学依据。蒙药索布如•札特巴是由石榴、豆蔻、广枣等8味蒙药材组成。“蒙药正典”中有记载其具有祛寒、除湿等功能。临床上主要用来治疗痰、寒、气三型的心脏病[1]。但迄今未见对其药理学方面的研究报道。本课题组前期研究了索布如•札特巴体外抗氧化活性,发现其水提取物和乙醇提取物都具有良好的体外抗氧化作用[2]。为进一步探讨此药的药理作用,我们采用采用D-半乳糖致亚急性衰老的小鼠模型,检测了索布如•札特巴对催老模型小鼠血浆MDA含量,SOD、GSH-Px活性以及肝指数、脾指数等指标,以期揭示索布如•札特巴抗氧化作用机理。
1材料与方法
1.1材料与仪器
蒙药索布如•札特巴由内蒙古中蒙医院提供。D-半乳糖由上海试剂二厂提供;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试盒由南京建成生物工程研究所提供;实验用水为二次石英亚沸蒸馏水。主要仪器有,LabTechUV1000紫外可见分光光度、KQ3200V型超声波清洗器、FA2104N电子天平等。
1.2提取方法
准确称取样品1.00g于100ml锥形瓶中,加入蒸馏水15ml,浸泡6h,超声辅助提取(12kHz,10min),过滤,滤液用冷冻干燥仪干燥,称重保存。
1.3小鼠衰老模型的建造及给药方法
1月龄的ICR小鼠,体重26±2.1g,雄性,50只,由内蒙古科技大学医学部动物室提供。小鼠在实验室环境下(25℃,湿度65%)适应性饲养1周后随机分为5组,即正常对照组、衰老模型组、给药高、中、低剂量组[3]。除正常对照组外,其余各组小鼠每天皮下注射D-半乳糖1g/kg,持续六周,正常对照组小鼠每天皮下注射等量生理盐水。造模7天后开始,高、中、低剂量组用索布如•札特巴提取物分别以每天16,8,4mg/kg的剂量灌胃,正常对照组及模型组用等量生理盐水灌胃,连续六周。
1.4各种指标的测定方法
实验小鼠于末次给药停药2天后断食12小时。称体重,眼眶取血,肝素抗凝,分离血浆立即进行指标检测。同时迅速取出肝、脾,称重。MDA、SOD及GSH-Px的测定按照试剂盒的说明进行。脏器指数按下式计算:脏器指数=脏器重量(g)/体重(g)·100%。
1.5数据处理
实验数据处理采用SPSS10.0统计软件进行,实验数据用±s表示,采用t检验进行统计学处理,组间比较用单因素方差分析。
2结果
2.1索布如•札特巴提取物对衰老模型小鼠肝指数、脾指数的影响
从表1可以看出,衰老模型组小鼠肝指数与脾指数都降低,肝指数明显低于正常组(P<0.01),而造模7天后开始灌服索布如•札特巴水提取物8,16mg/kg,可显著抑制肝指数的降低(P<0.01),对脾指数的降低也有一定的抑制作用(表1)。
2.2索布如•札特巴提取物对小鼠血浆MDA、SOD、GSH-Px的影响
从表1可看出,模型组小鼠血浆中MDA含量明显高于正常对照组(P<0.01),SOD与GSH-Px活性明显低于正常对照组(P<0.05)。这些结果表明,衰老模型组小鼠体内自由基代谢异常。索布如•札特巴提取物高、中剂量组均能显著降低衰老小鼠血浆中MDA含量(P<0.01),并能显著提高SOD(P<0.05),高剂量组能显著提高GSH-Px活性(P<0.05)。上述结果表明索布如•札特巴可提高机体抗氧化物酶的活力,降低脂质过氧化水平(表1)。
3讨论
D-半乳糖衰老模型是按照衰老的代谢学说建立的,表现出与自然衰老相似的一系列生理生化改变,其主要表现为机体氧化水平明显增加,心肝脑肺脾肾等脏器指数降低[4,5]。
MDA可反映生物膜氧化的程度,通过测定MDA可以间接反应机体氧化水平和老化程度[6]。而抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性是反映机体抗氧化能力的重要指标。SOD能促使超氧化物阴离子自由基变为过氧化氢和氧离子,从而减少脂质过氧化反应,使机体细胞和组织免受损害[7]。GSH-Px是机体重要的催化过氧化氢分解的酶,可起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。本研究发现,衰老模型组血浆MDA值高于正常对照组,而给药组的值低于模型对照组,这说明索布如•札特巴可减轻生物膜的受损程度,维持生物膜的正常功能而起到抗衰老的作用。并且,索布如•札特巴提取物可以抑制D-半乳糖导致的血浆SOD、GSH-Px活性的降低,说明索布如•札特巴可以提高模型血浆中SOD、GSH-Px的活性、清除自由基,具有一定的延缓衰老的作用。
脏器指数是脏器重占体重的百分数。过量注射D-半乳糖会引起糖代谢紊乱,使机体过氧化反应增强,产生大量自由基损害了肝脏,使肝指数发生明显变化[3,4,5]。本实验中模型组小鼠与正常组相比,其肝指数明显降低,而高剂量组均可提高肝指数,表明索布如•札特巴可以降低肝脏的受损程度,保护肝脏。脾脏是机体的免疫器官,脾脏中有T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞,与细胞免疫、体液免疫均有密切关系[3]。模型对照组的脾指數低于正常对照组而索布如•札特巴高剂量组的脾指数高于模型对照组接近正常对照组,说明索布如•札特巴对脾脏也有一定的保护作用。
综上所述,索布如•札特巴提取物中含有有益于健康的抗氧化活性成分,具有良好的抗氧化能力,能在一定程度上延缓由于注射D-半乳糖引起的小鼠体内抗氧化能力的降低。提示索布如•札特巴在抗衰老,防治老年性疾病方面具有重要的应用价值。
参考文献
[1] 武绍新.蒙医成方选[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社,1984:309.
[2] 敖恩宝力格,王金妞,邰丽华.蒙药索布如•札特巴提取物的抗氧化活性研究[J].时珍国医国药,2010,21(5):1153-1154.
[3] 王喆,陆承荣,宋建贞.D-半乳糖亚急性中毒大鼠拟衰老生理生化改变[J].中国比较医学杂志,2003,13(4):236-238.
[4] 徐清萍,陶文沂,敖宗华.食醋对催老小鼠抗氧化活性的影响[J].食品科学,2005,126(12):205-207.
[5] 朱庆磊,杨契,薛桥.人工致衰老和自然衰老小鼠抗氧化能力改变的对比研究[J].中国老年学杂志,2003,23(7):448-450.
[6] 陈瑗,周玖.自由基医学基础与病理生理[M].北京:人民卫生出版社,2002:157-159.
[7] GiardinoR,GiavaresiG,FiniM,etal.Theroleofdifferentchemicalmodificationsofsuperoxidedismutaseinpreventingaprolongedmuscularischemia/reperfusioninjury[J].ArtifCellsBloodSubstitImmobilBiotechnol,2002,30(3):189-198.