目的 建立α-唾液淀粉酶(salivary alpha-amylase,sAA)胶体金免疫渗滤法,制备胶体金免疫渗滤试纸,并将该试纸用于中药白术及葛根的酶学作用研究.方法 采用胶体金标记技术,筛选最佳标记pH值和抗体标记量,制备金标抗体复合物,再利用纸基免疫渗滤技术,设计单因素试验,优化包被液种类、包被条件、封闭液种类、封闭条件、洗涤液种类、抗原抗体最佳工作浓度、包被抗原与金标抗体反应条件、待测样品与金标抗体反应条件共8个影响因素,建立胶体金免疫渗滤检测法,同时对免疫试纸的灵敏度和初步稳定性进行验证,并利用该试纸检测不同浓度中药白术和葛根提取液对sAA与其抗体特异性结合活性的促进或抑制作用.结果 胶体金标记抗体的最佳pH值为8.5,最佳抗体稀释比例为1 ∶ 125,在此条件下制备的金标抗体复合物稳定性良好,活性效价为1 ∶ 384.sAA胶体金免疫渗滤法的最适反应条件为:以含8％甲醇的PBS缓冲液(0.01 mol/L,pH 7.4)为包被液稀释sAA至10 μg/mL,37℃包被 15 min;以含2％BSA 的 PBS 缓冲液(0.01 mol/L,pH 7.4)为封闭液,37℃封闭 15 min;以含0.4％Tween-20的PBS缓冲液(0.01 mol/L,pH 7.4)为洗涤液对NC膜进行洗涤;待测样品与稀释比例为1 ∶ 1的金标抗体于37℃下提前反应15 min,加入NC膜后25℃条件下再反应20 min,洗涤后根据斑点显色情况判断实验结果.制备的胶体金免疫渗滤试纸灵敏度为5 μg/mL,稳定性良好.中药酶学作用研究结果显示,白术可促进sAA与其抗体的特异性结合,而葛根具有抑制作用,且两者作用程度与中药提取液的浓度呈正相关.结论 建立的sAA胶体金免疫渗滤法操作简便、快速,成本低,灵敏度和稳定性良好,可为sAA的快速检测提供新方法.