【摘 要】
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目的 构建雌激素受体α(Erα)的转录激活系统.方法 采用PCR技术构建Erα及其不同功能区(AF1、AF2和DBD)重组质粒并进行鉴定.将培养好的293T细胞分为pGAL-Erα组(转染pGAL-Erα重组质粒)、pGAL-ERαAF1组(转染pGAL-ERαAF1重组质粒)、pGAL-ERαAF2组(转染pGAL-ERαAF2重组质粒)、pGAL-ERαDBD(转染pGAL-ERαDBD重组质
【机 构】
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福州,武警福建总队医院检验科,350003,解放军总医院第一附属医院结核科,100850北京,军事医学科学院生物工程研究所肿瘤分子生物学研究室,100850北京,军事医学科学院生物工程研究所肿瘤分子生
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目的 构建雌激素受体α(Erα)的转录激活系统.方法 采用PCR技术构建Erα及其不同功能区(AF1、AF2和DBD)重组质粒并进行鉴定.将培养好的293T细胞分为pGAL-Erα组(转染pGAL-Erα重组质粒)、pGAL-ERαAF1组(转染pGAL-ERαAF1重组质粒)、pGAL-ERαAF2组(转染pGAL-ERαAF2重组质粒)、pGAL-ERαDBD(转染pGAL-ERαDBD重组质粒)及空白对照组(转染空载体)5组,各组同时转染0.2 μg雌激素受体作用元件荧光素酶报告基因(ERE-LUC)和0.1 μg表达β-半乳糖苷酶的质粒,作用4 h后将各组细胞分为两部分,一部分加入雌二醇(终浓度10 nmol/L)诱导,另一部分继续培养,24 h后分别测定各组加入雌二醇诱导及未加雌二醇诱导的细胞的转录激活活性,并计算各组细胞与空白对照组细胞转录激活活性的比值.蛋白印迹法测定各重组质粒蛋白在293T细胞中的表达.结果 加入雌二醇诱导后,pGAL-Erα组、pGAL-ERαAF1组、pGAL-ERαAF2组、pGAL-ERαDBD组细胞与空白对照组细胞的转录激活活性比值分别为20.44±1.01、2.09±0.11、8.09±0.30和1.05±0.09.构建的Erα及其不同功能区重组质粒蛋白在293T细胞中均有表达.结论 成功构建了Erα的转录激活系统。
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