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【摘 要】 目的：建立天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱仪，waters Symmetry C18色谱柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-水为梯度洗脱；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；检测波长：250nm。结果：欧前胡素在1.424～71.2μg/ml的范围内线性关系良好，加样回收率为102.9%，RSD为1.45%；异欧前胡素在1.337～66.85μg/ml的范围内线性关系良好，加样回收率为102.5%，RSD为1.85%。结论：所建立的方法可以用来检测天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素的含量。
【关键词】 高效液相色谱；天麻头痛片；欧前胡素；异欧前胡素
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）12-0005-02
天麻头痛片具有养血祛风、散寒止痛的功效，临床用于治疗头痛、血虚头痛，血瘀头痛。方中天麻为君药，治一切头风；白芷祛风散寒、通窍止痛，为臣药。2010版《中国药典》[1]测定了天麻头痛片中天麻素的含量，但对白芷中起止痛作用的香豆素类成分含量未曾测定。欧前胡素和异欧前胡素是白芷的香豆素类的代表性成分[2]，本文采用HPLC测定天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素的含量，为完善天麻头痛片的质量控制提供了快速准确地测定方法。
1 仪器与材料
1.1 实验仪器 Waterse 2695高效液相色谱仪（美国waters公司）；MSA225-000-DU型电子天平（德国赛多利斯公司）。
1.2 试剂与样品 欧前胡素（批号：110827-201109，中国食品药品检定研究院）；异欧前胡素（批号：110826-201214，中国食品药品检定研究院）；甲醇、乙腈（色谱纯，J.T.BAKER）；超纯水为Molecular纯水机制备；天麻头痛片（批号：121203，辽宁中医学院制药有限公司；批号：130401，沈阳东新药业有限公司）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Waters Symmetry C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：乙腈∶甲醇∶水；检测波长：250 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：25℃。流动相梯度如表1。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取欧前胡素与异欧前胡素对照前，加甲醇配置成浓度分别为0.01424mg/ml及0.01337mg/ml的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取样品10片，除去糖衣后，研细，精密称取1g，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声提取30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，即得。
2.4 阴性对照样品的制备 按处方制备不含白芷的药物，按照“2.3”项的方法制备阴性对照样品溶液。
2.5 线性关系的考察 分别取混合对照品溶液1、5、10、20、30、40、50μl，按“2.1”色谱条件测定峰面积。以峰面积（Y，A）和进样量（X，μg）做标准曲线。结果表明，欧前胡素在1.424～71.2uμg/ml范围内成良好的线性关系，回归方程为y= 47253X+1520.6，r=0.9999；异欧前胡素在1.337～66.85μg/ml范围内成良好的线性关系，回归方程为y= 44432X+347.82，r=0.9999。
2.6 精密度 取混合对照品溶液，进样6次。测得欧前胡素、异欧前胡素峰面积值的RSD分别为0.81%、0.98%。表明仪器的精密度良好。
2.7 稳定性试验 取混合标准液，分别在0、2、5、12、24、30h进样，测定峰面积。测得欧前胡素、异欧前胡素峰面积值的RSD分别为0.81%、0.98%，表明供试品溶液在30h内稳定。
2.8 重复性试验 取同一样品制备的供试品溶液6份，按“2.1”色谱条件进样，计算样品中欧前胡素和异欧前胡素含量。欧前胡素含量的RSD为0.70%，异欧前胡素含量的RSD为1.41%。表明实验的重复性良好。
2.9 加样回收率测定 取片剂30片，除去糖衣后，研细，精密称取1.2g 6份，分别精密加入欧前胡素0.4272mg，异欧前胡素0.1337mg，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声提取30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，进样，计算加样回收率。结果见表2。
2.10 样品测定 取样品2份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算样品中欧前胡素与异欧前胡素的含量。天麻头痛片（批号：121203）的欧前胡素含量为0.33mg/g、异欧前胡素含量为0.13mg/g ；天麻头痛片（批号：130401）的欧前胡素含量为0.39mg/g，异欧前胡素含量为0.13mg/g。
3 讨论
3.1 波长的选择 欧前胡素在249nm和300nm有最大吸收，异欧前胡素在251和310nm处有最大吸收。本文选择250nm作為检测波长，同时测定欧前胡素与异欧前胡素能够具有较好的灵敏度。
3.2 流动相的选择 实验中比较了甲醇-水梯度洗脱和乙腈-水梯度洗脱，发现两种方法在待测峰处均有小杂峰难以分离，但杂峰干扰情况不相同。因此本文采用了乙腈-甲醇-水梯度洗脱，得到的分离效果和峰型都较好。
3.3 本文通过测定天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素，提高和完善了天麻头痛片的质量控制方法。所建立的方法简单，准确，分离度与重现性好，可以用来控制天麻头痛片的质量。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：518-519.
[2]胡华杰，楼招欢，吕圭源，等.HPLC测定不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量 [J].浙江中医药大学学报，2010，34（3）：418-420.
（收稿日期：2015.04.18）
【关键词】 高效液相色谱；天麻头痛片；欧前胡素；异欧前胡素
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）12-0005-02
天麻头痛片具有养血祛风、散寒止痛的功效，临床用于治疗头痛、血虚头痛，血瘀头痛。方中天麻为君药，治一切头风；白芷祛风散寒、通窍止痛，为臣药。2010版《中国药典》[1]测定了天麻头痛片中天麻素的含量，但对白芷中起止痛作用的香豆素类成分含量未曾测定。欧前胡素和异欧前胡素是白芷的香豆素类的代表性成分[2]，本文采用HPLC测定天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素的含量，为完善天麻头痛片的质量控制提供了快速准确地测定方法。
1 仪器与材料
1.1 实验仪器 Waterse 2695高效液相色谱仪（美国waters公司）；MSA225-000-DU型电子天平（德国赛多利斯公司）。
1.2 试剂与样品 欧前胡素（批号：110827-201109，中国食品药品检定研究院）；异欧前胡素（批号：110826-201214，中国食品药品检定研究院）；甲醇、乙腈（色谱纯，J.T.BAKER）；超纯水为Molecular纯水机制备；天麻头痛片（批号：121203，辽宁中医学院制药有限公司；批号：130401，沈阳东新药业有限公司）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Waters Symmetry C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：乙腈∶甲醇∶水；检测波长：250 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：25℃。流动相梯度如表1。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取欧前胡素与异欧前胡素对照前，加甲醇配置成浓度分别为0.01424mg/ml及0.01337mg/ml的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取样品10片，除去糖衣后，研细，精密称取1g，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声提取30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，即得。
2.4 阴性对照样品的制备 按处方制备不含白芷的药物，按照“2.3”项的方法制备阴性对照样品溶液。
2.5 线性关系的考察 分别取混合对照品溶液1、5、10、20、30、40、50μl，按“2.1”色谱条件测定峰面积。以峰面积（Y，A）和进样量（X，μg）做标准曲线。结果表明，欧前胡素在1.424～71.2uμg/ml范围内成良好的线性关系，回归方程为y= 47253X+1520.6，r=0.9999；异欧前胡素在1.337～66.85μg/ml范围内成良好的线性关系，回归方程为y= 44432X+347.82，r=0.9999。
2.6 精密度 取混合对照品溶液，进样6次。测得欧前胡素、异欧前胡素峰面积值的RSD分别为0.81%、0.98%。表明仪器的精密度良好。
2.7 稳定性试验 取混合标准液，分别在0、2、5、12、24、30h进样，测定峰面积。测得欧前胡素、异欧前胡素峰面积值的RSD分别为0.81%、0.98%，表明供试品溶液在30h内稳定。
2.8 重复性试验 取同一样品制备的供试品溶液6份，按“2.1”色谱条件进样，计算样品中欧前胡素和异欧前胡素含量。欧前胡素含量的RSD为0.70%，异欧前胡素含量的RSD为1.41%。表明实验的重复性良好。
2.9 加样回收率测定 取片剂30片，除去糖衣后，研细，精密称取1.2g 6份，分别精密加入欧前胡素0.4272mg，异欧前胡素0.1337mg，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声提取30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，进样，计算加样回收率。结果见表2。
2.10 样品测定 取样品2份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算样品中欧前胡素与异欧前胡素的含量。天麻头痛片（批号：121203）的欧前胡素含量为0.33mg/g、异欧前胡素含量为0.13mg/g ；天麻头痛片（批号：130401）的欧前胡素含量为0.39mg/g，异欧前胡素含量为0.13mg/g。
3 讨论
3.1 波长的选择 欧前胡素在249nm和300nm有最大吸收，异欧前胡素在251和310nm处有最大吸收。本文选择250nm作為检测波长，同时测定欧前胡素与异欧前胡素能够具有较好的灵敏度。
3.2 流动相的选择 实验中比较了甲醇-水梯度洗脱和乙腈-水梯度洗脱，发现两种方法在待测峰处均有小杂峰难以分离，但杂峰干扰情况不相同。因此本文采用了乙腈-甲醇-水梯度洗脱，得到的分离效果和峰型都较好。
3.3 本文通过测定天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素，提高和完善了天麻头痛片的质量控制方法。所建立的方法简单，准确，分离度与重现性好，可以用来控制天麻头痛片的质量。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：518-519.
[2]胡华杰，楼招欢，吕圭源，等.HPLC测定不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量 [J].浙江中医药大学学报，2010，34（3）：418-420.
（收稿日期：2015.04.18）