【摘 要】
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为明确黑芝麻多酚氧化酶的酶学性质,利用大肠杆菌Escherichia coli原核表达了黑芝麻多酚氧化酶(Black sesame polyphenol oxidase,BsPPO).将合成的基因构建至pMAL-c5x载体,并在大肠杆菌中进行表达,对重组蛋白进行分离纯化及融合标签切除,获得的BsPPO蛋白用于酶学性质探究.结果 表明,合成的Bsppo基因1752 bp,编码585个氨基酸,理论蛋白分子量为65.3 kDa;构建的pMAL-c5x-Bsppo重组质粒在大肠杆菌Escherichia coli
【机 构】
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华南农业大学食品学院,广东广州 510640;广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所农业农村部功能食品重点实验室/广东省农产品加工重点实验室,广东广州 510610;广东省农业科学院蚕业与农产品加工研
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为明确黑芝麻多酚氧化酶的酶学性质,利用大肠杆菌Escherichia coli原核表达了黑芝麻多酚氧化酶(Black sesame polyphenol oxidase,BsPPO).将合成的基因构建至pMAL-c5x载体,并在大肠杆菌中进行表达,对重组蛋白进行分离纯化及融合标签切除,获得的BsPPO蛋白用于酶学性质探究.结果 表明,合成的Bsppo基因1752 bp,编码585个氨基酸,理论蛋白分子量为65.3 kDa;构建的pMAL-c5x-Bsppo重组质粒在大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3)中可溶表达了MBP-BsPPO蛋白;酶切去除MBP融合标签后对BsPPO进行了酶学性质研究,结果表明BsPPO的最适温度和pH分别为25℃和4.0,在低温和弱酸性环境中有较好的稳定性.短时间低强度的光照和Cu2+可激活BsPPO的活性,Zn2+和Ca2+能抑制其活性.BsPPO可催化单酚、二酚以及三酚类化合物,对L-酪氨酸以及香草酸表现出较高的催化活性,此外BsPPO还对黑芝麻中含有的2-甲氧基肉桂酸、吲哚3-羧酸和根皮素表现出良好的催化活性.研究结果为黑芝麻多酚氧化酶酶学特性的明确奠定了理论基础.
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