【摘 要】
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目的:构建重组真核表达质粒pEGFP-C1-SR-AI在293T细胞上获得高表达,并对A类I型清道夫受体(SR-AI)相应的功能进行鉴定.方法:依据人A类I型清道夫受体基因MSRI的cDNA设计引物,用
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目的:构建重组真核表达质粒pEGFP-C1-SR-AI在293T细胞上获得高表达,并对A类I型清道夫受体(SR-AI)相应的功能进行鉴定.方法:依据人A类I型清道夫受体基因MSRI的cDNA设计引物,用PCR等分子克隆技术构建重组真核表达载体pEGFP-C1-SR-AI,测序证实后,用脂质体法转染293T细胞.用RT-PCR和Western blotting检测SR-Al受体的表达,脂质油红O化学染色法检测实验组细胞的脂质摄取虽的变化,通过细胞黏附性实验检测其黏附性的改变.结果:转染后实验组SR-AI mRNA表达及蛋白合成明显高于对照组和空载体组,同时发现泡沫细胞转化率由对照组和空载体组的10%显著增加到实验组的20%,且细胞黏附性也提高2倍以上.结论:成功构建了重组真核表达质粒,并在293T细胞获得了高表达,提高了293T细胞的摄脂能力和黏附性,为进-步研究此受体功能的改变对动脉粥样硬化病理发生过程的影响奠定基础.
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