斜带石斑白细胞cDNA文库的构建

来源 :水产学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：liongliong453

【摘要】

：

用Tripure试剂盒提取斜带石斑白细胞总RNA,反转录合成第一链cDNA,进行长距离PCR,蛋白酶K消化,Sfi I酶切,通过CHROMASPIN-400柱,回收大于500bp的cDNA,与λTripIEx2载体连接,体

【作者】

：

殷志新翁少萍叶巧真何建国

【机构】

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中山大学生命科学学院

【出处】

：

水产学报

【发表日期】

：

2001年6期

【关键词】

：

斜带石斑白细胞 CDNA文库石斑鱼 Epinephelus coioides Leucocytes λTripIEx2 cDNA Library

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用Tripure试剂盒提取斜带石斑白细胞总RNA,反转录合成第一链cDNA,进行长距离PCR,蛋白酶K消化,Sfi I酶切,通过CHROMASPIN-400柱,回收大于500bp的cDNA,与λTripIEx2载体连接,体外包装后构建了斜带石斑白细胞的cDNA文库.库容1.65×1.06,重组频率82%,扩增后滴度7.5×109pfu·mL-1.插入片断长度500～2300bp,最多的是在750～1000bp范围.本文库可作为筛选斜带石斑细胞因子基因的重要资源.

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