【摘 要】
：
目的:构建基于Xcm I识别序列的T载体并对与其连接的PCR片段进行优化。方法:首先将5’和3’端含有Xcm I识别序列的人组蛋白H4 c DNA定向克隆至p CDNA3.0表达载体中,再用Xcm I
【机 构】
：
军事医学科学院卫生学环境医学研究所,北京赛德维康药物研究院
【基金项目】
：
国家重点基础研究发展计划资助（973计划）（2012CB518200）
论文部分内容阅读
目的:构建基于Xcm I识别序列的T载体并对与其连接的PCR片段进行优化。方法:首先将5’和3’端含有Xcm I识别序列的人组蛋白H4 c DNA定向克隆至p CDNA3.0表达载体中,再用Xcm I酶切得到基于p CDNA3.0载体骨架的T载体,为提高T载体与DNA片段的连接效率,在DNA片段PCR扩增前将其引物进行磷酸化并在PCR结束后再用Taq DNA聚合酶和d ATP处理,分别将长度为312 bp和1 329 bp的PCR片段T载体连接并将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,培养转化子,通过菌液PCR和琼脂糖凝胶电泳估算转化子的阳性率。结果:经Xcm I酶切后的T载体能高效地与目的 DNA片段连接;除T载体本身质量外,扩增DNA片段所用引物的磷酸化与否也是影响克隆效率的重要因素之一;对较大的插入片段而言,经PCR扩增、纯化后再用Taq DNA聚合酶和d ATP处理也能够显著增加连接效率。结论:克服了对蓝白筛选或插入自杀基因等实验条件的限制,可为T载体的常规制备并与目的片段进行高效地连接提供了新的线索。
其他文献
从装夹因素、切削角度、走刀形式与路线以及工序工艺路线等方面,对薄壁零件数控加工的影响因素进行了探讨,提出了改进零件装夹方式、仿真数控技术以及刀具路径修正等优化方法
蔬菜水果是鲜活食品,为延长其保鲜期,国外科研人员发明了多种保鲜技术.
<正> 近几年来,随着采煤机械化的不断发展,原来的采区划分和巷道布置以及生产系统已不适应。主要表现在工作面的走向太短。从而带来了工作面接续紧张、采掘关系失调等现象。
劫后余生的文坛泰斗巴金，晚年用全部人生经验倾心创作《随想录》，发出“要说真话”的呐喊。当时不明世事，热衷于风花雪月作品的我觉得巴老的呐喊有点可笑，笑他年老力衰，江郎才尽，再
我国公司治理已经进入新的时期，需要直面更多更艰深的难题，诸如加强上市公司的监管，解决上市公司自主治理的动力机制问题，如何协调上市公司诸利益相关者乃至与全社会的关系，如何加强央企的公司治理等，将是长期面对的艰巨课题。 全流通时代监管能力面临的新考验 全流通时代，上市公司违规、虚假信息披露的动机更加复杂，手段更加隐蔽，与利益输送、内幕交易和操纵市场结合的倾向性更加突出。目前，我国上市公司收
动词和动词短语辨析无论是在高考单项填空题还是完形填空题中都是必考内容之一，所占比例也最大。从近年高考试题来看，考查的动词和动词短语都是一些常见的词汇，并不生僻，考点主要
<正> 特征特性:早中熟品种,株高55cm,始花节位7—9节。果长15—18cm,粗5—6cm,单果质量120—150克,大果可达180克以上,单株挂果15—20个,最多可挂果50个以上,亩产6500千克左
分析对比本届“集团管控能力百强榜”，对我国企业有如下启示一：集团管控能力将成为跨国公司国际化竞争的关键从世界管控能力百强榜中，我们可以清晰的看到，一个国家跨国企业的多寡
迈克尔·杰克逊的成功，其实是商业资本运作下制造明星的成功，使得后来全世界的明星无一不是复制于此种模式 1842年中英签订《南京条约》时，魏源著成《海国图志》，挥毫写下“师夷长技以制夷”。100多年后，世界上最疯狂的汽车电视节目《Top Gear》上展览出一款全新劳斯莱斯照片，它的制造商却是中国某厂家。这款劳斯莱斯也有一只金色飞翔女神的车标，但只有翅膀，没有头。看到这一幕，三位英国鼎鼎大名的主持人
4月27日傍晚，央行宣布自4月28日起上调金融机构贷款基准利率：金融机构一年期贷款基准利率上调0．27个百分点，由现行的5．58％提高到5．85％；其他各档次贷款利率也相应调整；金融机构存款利率保持不变。这次备受关注的加息动作，距2004年10月的央行加息已有一年半的时间，但起因均缘于高层决策者对经济过热的普遍担心。 此前公布的宏观经济数据显示,2006年一季度GDP增长高达10．2％；新增贷款