【摘 要】
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目的 采用电穿孔方法,介导质粒载体pEGFP-c1转入兔成体成纤维细胞,探讨建立电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的基本条件.方法 电穿孔介导质粒载体pEGFP-c1转入7-10代
【机 构】
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上海交通大学医学院实验动物科学部,上海,200025;东北林业大学野生动物资源学院,哈尔滨,150040;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐,830052
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目的 采用电穿孔方法,介导质粒载体pEGFP-c1转入兔成体成纤维细胞,探讨建立电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的基本条件.方法 电穿孔介导质粒载体pEGFP-c1转入7-10代兔耳成体成纤维细胞系GG,研究不同电压、电容、DNA剂量,孵育温度的条件下,观察细胞存活数,流式细胞仪测试GFP的含量.结果 以PBS作为电击基础液、细胞浓度2×106个/ml,电压250 V、电容700 μF,DNA用量30 μg时,兔耳成纤维细胞的转染率和存活率最佳.且电击前冰浴10 min,电转染后37℃孵育10 min有利于提高细胞的转染率和存活率.结论 在合适电压、电容、DNA剂量条件下,电转染提供了外源基因转染兔耳成体成纤维细胞适用性;电转染前的一定时间冰浴和电转染后一定温度孵育可使电转染效率得到改善.
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