论文部分内容阅读
目的:探讨肝素酶(heparanase,HPSE)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞与血管内皮细胞黏附及穿内皮迁移的影响。方法:选用人正常脐静脉内皮细胞株HUVEC-C,肝LO-2细胞,肝癌Hep G2、BEL-7402和HCCLM3细胞,用Real-time PCR筛选高表达HPSE的HCC细胞;设计4个HPSE基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)序列、构建质粒,并筛选出最优RNAi质粒;用该RNAi质粒转染高表达HPSE的HCC细胞,同时设空白对照组、阴性对照组和未转染的HCC细胞组;黏附试验观察各组HCC细胞与HUVEC-C细胞的黏附情况;Transwell小室法观察HCC细胞穿HUVEC-C细胞迁移情况;癌细胞均以0.25%玫瑰红染色、光镜下观察;酶标仪法分别测定脱色后各组细胞D值并分析比较。结果:HCCLM3细胞HPSE mRNA表达水平显著高于肝LO-2、Hep G-2和Bel-7402细胞[(5.72±0.62)vs(1.05±0.09)、(2.65±0.31)和(3.43±0.58),均P<0.01)];设计的4个HPSE之RNAi载体,以si HPSE-3158对HPSE基因表达的抑制效果最佳(P<0.05)。RNAi组HCCLM3细胞与HUVEC-C细胞黏附率显著低于空白对照组、阴性对照组和未转染的HCCLM3细胞组[(0.31±0.04)vs(0.46±0.06)、(0.45±0.05)和(0.64±0.09),均P<0.01)]。RNAi组HCCLM3细胞穿HUVEC-C细胞迁移率也显著低于空白对照组、阴性对照组和未转染的HCCLM3细胞组[(0.28±0.03)vs(0.41±0.04)、(0.41±0.05)和(0.43±0.05),均P<0.05)]。结论:HPSE参与介导HCC细胞与血管内皮细胞的黏附及HCC细胞穿内皮迁移,可能是HCC微血管捕获、血行转移的重要因素。