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目的建立一种同时测定血浆中对乙酰氨基酚(PAC)和维生素C(VitC)浓度的梯度洗脱高效液相色谱法,以用于二者组成的复方制剂的体内评价研究。方法血浆样品以高氯酸直接沉淀蛋白后采用HPLC-UV结合梯度洗脱法在Hypersil ODS柱上分离测定,流动相为磷酸缓冲盐(A)和甲醇(B),流速1.0mL·min-1。洗脱条件:t=0,A=100%;t=1.5min,A=82%,B=18%;t=7.0min,A=100%,检测波长245nm。结果对乙酰氨基酚与维生素C分离度好,内源性杂质不干扰测定。在浓度0.625~40mg·L-1内,对乙酰氨基酚和维生素C的浓度(C)与各自的峰面积(y)线行关系良好,最低定量限均为0.0625mg·L-1。绝对回收率分别为对乙酰氨基酚:84.9%~97.2%(n=5);维生素C:81.9%~91.3%(n=5)。方法回收率分别为PAC:94.9%~108.2%(n=15);维生素C:105.7%~108.9%(n=15)。对乙酰氨基酚和VitC的日内RSD分别为0.53%~4.23%(n=15)和0.57%~3.79%(n=15);日间RSD分别为3.15%~9.79%(n=15)和6.79%~7.72%(n=15)。结论建立的高效液相梯度洗脱法灵敏、简便、快速、准确,适用于两者组成的复方制剂的体内过程研究。