【摘 要】
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目的构建变异链球菌低p H感应系统,原位可视地检测其所处环境的p H。方法通过聚合酶链反应(PCR)和基因重组技术,克隆得到唾液链球菌57.I的ureⅠ基因启动子片段(pureⅠ)及绿色
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目的构建变异链球菌低p H感应系统,原位可视地检测其所处环境的p H。方法通过聚合酶链反应(PCR)和基因重组技术,克隆得到唾液链球菌57.I的ureⅠ基因启动子片段(pureⅠ)及绿色荧光蛋白(GFP)的编码基因gfp,经过酶切后将两个基因片段连接融合,然后再经双酶切将融合片段与大肠杆菌-变异链球菌穿梭载体p DL278连接,构建出重组质粒p DL278-pureⅠ-gfp。将重组质粒转化到变异链球菌UA159中,使用荧光显微镜观察其在不同p H条件和不同处理时间的单位面积荧光强度。结果目的基因pureⅠ和gfp扩增片段大小分别为450 bp和717 bp,与预期大小相符。构建的重组质粒p DL278-pureⅠ-gfp测序结果与数据库比对完全一致。重组变异链球菌低p H报告菌株PCR扩增片段与预期结果相符。在一定范围内,变异链球菌低p H感应系统单位面积荧光强度随p H值的降低和处理时间的延长而增强。结论本研究成功构建了变异链球菌低p H感应系统,同时验证了唾液链球菌酸诱导启动子pureⅠ能在变异链球菌中正常发挥功能,为今后研究菌斑生物膜中原位p H的动态变化提供了新方法。
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