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目的:基于16S rRNA,构建治疗失败根管内微生物的16S rRNA基因文库,并通过分子生物学方法分析其微生物的多样性。方法:选取经完善根管治疗2年后失败的患牙20例,根管内取样提取细菌DNA;然后用PCR扩增细菌16S rRNA基因,并构建其基因文库;最后通过测序比对构建系统发育树以确定微生物种类。结果:PCR检测显示,所有样本中有细菌出现;20个样本中共发现15种不同的系统发育型细菌(phlylotype),分属4个细菌门(phylum):厚壁菌门(Firmicutes)、变异菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria);每个样本中检出1~6种不同的细菌系统发育型,平均每个样本中可检测到2.7种;在检出的15种细菌中,以粪肠球菌(Enterococcus faecali)的出现频次最高(60%,12/20),微小消化链球菌(Peptostreptoccus micros)次之(40%,8/20),而另外13种细菌的出现频次较低,其中有4种系统发育型细菌(Rummeliibacillus、Exiguobacterium aurantiacum、Pseudomonas veronii、phocaeicola abscessus)只出现了1次。结论:根管治疗失败主要是由多种细菌感染所致,其中以粪肠球菌的检出率最高。